快速内切酶DpnII，EnzymoPure™，阿拉丁

体内体外表达――Promega

(发音为ten a)的蛋白水解位点，使得纯化标签可从天然蛋白上分离。载体还带有方便得多克隆区域，便于构建融合蛋白。整个表达系统不过4000人民币，已经包含载体菌株检测试剂纯化柱和洗脱试剂等等，一如Promega产品的实惠价格。多系统表达，东边不亮西边亮Flexi® 载体系统是一种用于定向克隆蛋白编码序列的、简单而功能强大的方法。它是以两种稀有的限制性内切酶：Sgf I 和 Pme I为基础。这两种酶在我们试验常用到的物种：人、大鼠、小鼠、线虫等中出现频率都非常小，一般情况都在5%一下。该系统提供快速

mRNA富集还是rRNA去除

并被共同捕获出来。 Poly(A) 富集是一种非常经济高效且快速的预处理方法，可以选择主要编码蛋白质的 mRNA。它可用于所有具有 poly(A) 尾 RNA 的物种（真核生物），以去除不需要的 rRNA 并将测序数据集中在 mRNA 上。 然而，poly(A) 富集有两个主要缺点： ➊首先，它只能用于具有poly(A)-尾RNAs的物种。因此，它仅限于真核生物，不能用于原核生物。然而，真核生物也拥有我们感兴趣的缺少 poly(A) 尾的转录本。它们在 poly(A) 选择过程中

差异基因研究技术及其应用

expression，SAGE） SAGE其原理是以mRNA为模板，用生物素标记的Oligo（dT）为引物合成双链cDNA，以限制酶进行酶切，捕获cDNA 3′端；产物被分为两部分，分别与包含有标签内切酶位点的A、B连接子相接。经过酶切，就有可能得到只有9~10bp的标签序列。每两个标签的钝端结合后成为PCR的模板，以基于A、B连接子的引物进行PCR反应的结果是得到了大量每条包含两个不同来源标签的序列，接下来再用限制酶酶切、连接，就能将多个不同的标签链接在一起，克隆至质粒载体中后集中测序。SAGE可以检测不同