聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白

[目的与原理]
掌握一种聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的方法，并用此法进一步分析血清蛋白的组成。
1、聚丙烯酰胺凝胶
聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺（Acr）、NN′—甲叉双丙烯酰胺（Bis），在催化剂过硫酸铵（ammonium persulfate (NH ₄ ) ₂ S ₂ O ₈ 简称AP）或核黄素（ribofavin 即vitamin B2 ,C ₁₇ H ₂₀ O ₆ N ₄ ）和加速剂N,N, N′,N′—四甲基乙二胺（N,N,, N′N′—ytetramethyl ethyenediamine，简称TEMEM）的作用下，聚合而成的三维网状结构。
a.目前常用的催化体系：
(1) Ap—TEMED：
① TEMED催化Ap生成硫酸自由基：
S ₂ O ₈ ^2— →2SO ₄ ^—
（过硫酸） （硫酸自由基）
②硫酸自由基的氧原子激活Acr单体，并形成单体长链：

③Bis将单体长链间连成网状结构：

从反应式中可看出此凝胶是三维网状的，带不活泼的酰胺基侧链的聚合物，没有或很少带有离子侧链，因而凝胶性能稳定，无电渗作用。在碱性条件下，凝胶易聚合，其聚合的速度与Ap浓度平方根成正比。杂质、某些金属离子，低温和氧分子能延长或阻止碳链的延长与聚合作用。用此法聚合的凝胶孔径较小，常用于制备分离胶。