FITC标记凝集素的组织化学染色程序
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FITC
标记凝集素的组织化学染色程序
1．组织切片经脱蜡处理，若是Bouin液固定的组织，用70％乙醇洗3次除去组织切片内的黄色后，再用蒸馏水漂洗；
2．PBS漂洗(含1％牛血清白蛋白)2次，每次5分钟；
3．加入FITC-凝集素(PBS适当稀释)，置湿盒内孵育，室温1小时；
4．PBS漂洗3次，每次5分钟；
5．水溶性封片剂封片，荧光显微镜观察。
6．结果 FITC标记的凝集素能直接与组织细胞内的糖基结合，从而显示糖基的位置，可用于检测组织细胞中的糖成分，阳性部位呈黄绿色荧光。
7．注意事项
(1)固定液：以Bouin固定液为佳，也可用70％乙醇固定；
(2)与其他组织化学方法一样，染色过程中，应始终保持一定湿度，使切片保持湿润状态；
(3)需经预实验确定FITC-凝集素的最佳工作浓度；
(4)凝集素的活性部位需重金属离子维持，故可用TBS作为缓冲液，加微量的金属(CaCl2
、MgCl2
、MnCl2
各1．0mmol/L)，可增强凝集素的结合能力。
