生物素标记凝集素的组织化学染色程序
互联网
生物素标记凝集素的组织化学染色程序
因此,实验中可通过生化反应将凝集素结合在另外的生物素上.当标记生物素的凝集素与组织细胞膜的单糖结合后,再用ABC复合物中亲和素与该生物素结合,在糖基的位置可形成一个较大的复合物,以增加检测的敏感性。其染色程序如下:
1.切片脱蜡处理同前:
2.小鼠肝粉(10ug/ml,PBS配制)或生物素阻断剂孵育切片?室温10分钟,抑制组织中内源性生物素;
3.3%H2 O2 孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶,避免假阳性),PBS漂洗2次,每次5分钟;
4.用适当稀释度的生物素标记凝集素室温孵育切片45分钟:
5.PBS漂洗2次,每次5分钟;
6.ABC液孵育切片.室温30分钟,用前配制,可按试剂盒说明书操作,将20ul亲和素加20ul HRP标记的生物素,溶解在1.0mlPBS中;
7.PBS漂洗2次。每次5分钟;
8.呈色 加入DAB液暗处10~15分钟,室温;
9.流水冲洗;分钟,必要时可用苏木精复染,光镜观察记录;