酵母遗传学方法11：PCR介导基因破坏法
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PCR 介导基因破坏法
1． 反应混合物：
5 μ l 10 × Taq 缓冲液
5 μ l 25mmol/L MgCl2
2 μ l 10mmol/L dNTPs
10~100ng 模板 DNA
25pmols 引物（每种引物）
0.5 μ l Taq DNA 聚合酶（ 2U ）
2． PCR 循环参数：
94 ℃ 5 分钟
94 ℃ 1 分钟
55 ℃ 1 分钟
72 ℃ 2 分钟
10 个循环
94 ℃ 1 分钟
65 ℃ 1 分钟
72 ℃ 2 分钟
20 个循环
72 ℃ 10 分钟
