C1q放射免疫测定法
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一、实验试剂
CFD稀释液(即VBS)，10%三氯醋酸，C1q溶液。
二、实验设备
PEG(MW6 000)，离心机。
三、实验步骤
1. C1q标记法C1q的同位素标记，一般用125I，也可用131I。
125I的标记有两种方法，即氯胺T法和乳过氧化物酶法。下面介绍氯胺T法：
（1）在100 μl C1q(1 mg/ml)中，加入100 μCi125I，混匀，然后加入25 μl 0.4mol/L PB(pH值7.4，含1 mg氯胺T)，冰浴中搅拌4～6 min；
（2）立即加入50 μg/μl偏重亚硫酸钾中止反应，再加入50 μl 1%牛血清白蛋白作为载体蛋白；
（3） 过Sephadex G25柱(20 cm×0.5 cm，预先用pH值7.4、0.4 mol/L PB平衡，并注入1ml 1%牛血清白蛋白)，以与游离125I 分开；
（4） 以适当浓度分装后，放-70℃保存。为减少自身凝集，加入0.02% Tween20。
2. 取标记好的C1q，用CFD稀释到1 mg/ml。
3. 7 000 r/min离心30 min(4℃)，除去不溶性凝聚蛋白，上清液存放于4℃。
4. 取试管4支，每管加测定血清0.2 ml，CFD 0.2 ml，标记C1q 50 μl(1 μg/ml)。1、2管为测定管，3、4管为对照管。
5. 摇匀后，放25℃温箱60 min，取出再放4℃冰箱60 min。
6. 各管加3 ml PEG，最终浓渡为2.5%，摇匀后，放4℃ 2 h。
7. 3、4管加10%三氯醋酸，沉淀所有的蛋白。将4个管都以1 000 r/min离心20 min，去上清液，沉淀物放γ计数器内测cpm。
8. 计算
B=(a加b2加c加d2)×100
B：标记C1q结合量(%)。a、b：1、2管(测定管)cpm。c、d：3、4管(对照管)cpm。
