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        免疫酶标方法

        互联网

        5109

        一、直接法

        1.标本固定。

        2.PBS洗涤2×3分钟。

        3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。

        4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。

        5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。

        6.PBS洗涤3×3分钟。

        7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用提前15分钟配制。

        8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

        二、间接法

        1.标本固定。

        2.PBS洗涤2×3分钟。

        3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。

        4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。

        5.滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜。

        6.PBS洗涤3×3分钟。

        7.滴加酶标二抗,室温1小时。

        8.PBS洗涤3×3分钟。

        9.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。

        10. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

        三、PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)

        1.标定固定后,PBS洗涤。

        2.1% H2O2(或1% H2O2甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟。

        3.PBS洗涤2×3分钟。

        4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。

        5.滴加一抗,室温1小时或4℃过夜。

        6.PBS洗涤3×3分钟。


        7.滴加二抗,室温30分钟。

        8.PBS洗涤3×3分钟。

        9.加PAP复合物,室温60分钟。

        10.PBS洗涤3×3分钟。

        11.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。

        12.充分水洗。

        13.苏木精复染,封片观察。

        四、双PAP法

        1-10.同单PAP法。

        11.二次加酶标二抗。

        12.PBS洗。

        13.二次加PAP。

        14.PBS洗。

        15.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。

        16.苏木精复染核,封片,镜检。

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