PCR扩增标本的HLA-DR基因
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PCR 扩增标本的HLA-DR基因
（一）扩增引物
HLA-DRB1基因扩增引物为：5’-CCGGATCCTTCGTGTCCCCACAGCACG-3’
5’-TCGCCGCTGCACTGTGAAG-3’
（二）PCR扩增体系
（1） 1.0uM 扩增引物
（2） 300ng待测样本基因组DNA
（3） 2.0U Taq多聚酶
（1） 200uM 各种dNTP
（2） 用1 X PCR缓冲液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2 ，0.01%明胶）调至总体积100ul，并用50ul矿物油覆盖，防止水分蒸发。
（三）PCR扩增
（1） 采用下列PCR扩增条件进行扩增：
预变性：94℃，5分钟
变性： 94℃，30秒
退火： 55℃，50秒
延伸： 72℃，40秒
扩增循环数为33次
（2） PCR扩增完成后，取5ul进行琼脂糖凝胶电泳检查，上述引物扩增的产物长度为292bp。
