外周血单个核细胞样本的制备

血液是天然的单个细胞分散的细胞悬液，血细胞在生理状态下呈分散的游离状态。它是流式细胞分析的理想样品。血液中的主要细胞成分为白细胞、红细胞和血小板；而其中白细胞主要成分又分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。但在血细胞中一般检测单个核细胞较为多见。

一、外周血细胞样本制备方法的选择

一般检测细胞大分子成分---DNA、RNA、蛋白质的含量、基因表达蛋白等，多采用淋巴细胞分离液分离法制备单个核细胞悬液。这样就可以从血液中分离出单个核细胞---淋巴细胞、单核细胞、幼稚血细胞和肿瘤细胞等。外周血免疫细胞、细胞生长因子、某些基因蛋白、细胞表面标志检测可来用溶红细胞法。

二、单个核细胞样品制备程序

1. 取外周血 2 ml，肝素抗凝，用生理盐水将血稀释成 4 ml，混匀。

2. 将稀释后血液沿试管壁徐徐加入 4 ml 淋巴细胞分离液 Ficoll 到液面之上，勿用力过大，以免造成血液与分离液混合，保持清晰的分层状态。

3. 离心 2000 r/min，30 min，室温 18~20℃，离心后可见试管内的血液清楚地分为 4 层，上层为血浆层，中层为分离液层（单个核细胞所处于血浆层和分离液层中间），底层为红细胞层，红细胞层上为粒细胞层。

4. 用吸管将上层与中层之间的单个核细胞层吸出收集到另 1 试管中，用生理盐水洗 2 遍，每次均以 1500 r/min，离心 10 min，弃上清后即得到高纯度的单个核细胞悬液。

5. 用适当的固定液固定或置低温冰箱保存待用。