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        骨髓细胞单细胞悬液的制备

        相关实验:骨髓细胞单细胞悬液的制备

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒

        步骤

        1. 无菌抽取骨髓液 0.5 ml。

        2. 将骨髓标本滴入含 1000 U/ml 肝素抗凝剂的 1 ml PBS 液中。

        3. 再加入 PBS 液稀释至 10 mI。

        4. 用吸管吸取 5 ml 稀释骨髓液徐徐加入盛有 4 ml 的人类淋巴细胞分离液液面之上。

        5. 在以上条件下,骨髓有核细胞分层在 PBS 人类淋巴细胞分离液之间形成的界面上。

        6. 吸取有核细胞层,加入到 10 ml PBS 液中,混匀。

        7. 以 1000 r/min 离心 5 min,弃上清;收集骨髓细胞,加固定液或置低温冰箱备用。

        注意事项

        1. 抽骨髓液时,先将注射器针头、针筒、针栓用肝素浸润,抽取时力量适中。

        2. 在吸取淋巴细胞层时尽量少吸分离液,吸取量应掌握在 300 ul 左右,这样有利于洗去多余的分离液。

        3. 溶红细胞的方法:以等量的蒸馏水加入到沉淀中,轻轻摇动片刻,见粉红色出现,立即加入大量生理盐水,混匀,离心,去除上清即可。

        来源:丁香实验

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