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        PCR难题---请教高手。

        丁香园论坛

        1166
        我先后用以下三对引物扩同一片断,退火温度在55-65度,都不出来。第三对引物Lup1我试过加1,1.5,2ulDMSO还是不出。我该怎么办?难道中间的n的个数不正确,n是两个contig之间的gap,这段序列是从ncbi的UCSC库中提取的。
        先谢过!
        Lep5:125-779bp=655bp
        F:Acccacaactccccttctg(19)
        R:Ccacacttacacaccgcact(20)

        Lep1:47-738=692bb
        F:Tacgctgaacgacagtttgc(20)
        R:Aggaaggcacccagagaag(19)

        Lup1:126-779=654bp
        F:CCCACAACTCCCCTTCTGA(19)
        R:CCACACTTACACACCGCACT(20)

        1 ATGTGCTTCT AAGCAAGAAA ACGGGCCAGA GGCTAGGAGA TAAATGTACG
        51 CTGAACGACA GTTTGCACAG CTGCGTGTAC AAGAGCGAAT TCGAATTCCC
        101 TCATGTAGCA CGAACTCAGA CGTGACCCAC AACTCCCCTT CTGAGGGGCA
        151 CCGAGGGCGG CACCAGGTGA ACCCGCCCCG TTCCCGCCCA GCTCCCGCCT
        201 TCCTGCCGGG CAGGCCCCCA GGGACAGGGC CCTTCTCCTG CCCATCAACG
        251 CGGAGCCCCG CCCCCGCTAC CCCGCCCCGC CCTCCCGTTG GCTCCTCCCC
        301 TCCCTCGGGC GGTCGGAGGC GCGGCCGCGG TGTGCGCCCG GTCCCTTCCT
        351 GGNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
        401 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
        451 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
        501 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
        551 NNNNNNNNNN NNCCGCGCCG TCCCCCTCGG CCCCTCCCCC TCCCAACCCC
        601 TCACGGGGGC TGCTTTCCTC GCAGCCGCGC TGCCCTCCGG CCCGGCCTTG
        651 TCGGGGGCAG CGCGGGGGTC GGGCTGCGGC CCGGGTTGCT CCGTGCCCGG
        701 CCCTGCGCTC GGCATCCCGC TTCTCTGGGT GCCTTCCTGT GCTTCCAGCA
        751 AAGCGGGGCA GTGCGGTGTG TAAGTGTGGA TGCATCTATG TGTGCACACA
        801 GCTGTATGTG TAGGTGTACT TCTGAGCAGC CCGTGTGTGC TGGGCAGTGC
        851 ACCTTAGCCT TCAAGTGCAG CCTTGCGTCT ATGAGGGTAC GTGTGGGTTC
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