制备单克隆抗体的技术要点

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1．交瘤技术的技术流程
如图4-1所示。

图4 杂交瘤技术制备单克隆 抗体的基本流程

2． 技术要点
　　1） 免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原 的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。
　　2） 骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养 瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。