PCR反应体系的耐热DNA聚合酶
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PCR 反应体系的耐热DNA聚合酶
DNA的体外扩增是由许多不同来源的DNA聚合酶完成的。对PCR而言，热稳定DNA聚合酶（如Tag、Vent和pfu）优于热不稳定聚合酶（如T4、T7和Klenow），因为它们更易操作和实现自动化，其中以Taq DNA聚合酶的应用最为广泛。Taq DNA聚合酶的分子量为94kD,这种酶不显示任何3， →5， 核酸外切酶活性,它的最适反应温度在75℃左右,对95℃的变温具有良好的热稳定性。
在100μl PCR反应体系中,Taq DNA聚合酶的用量一般为1～2.5U之间。然而,由于DNA和引物的不同,以及其他条件的差别,聚合酶的使用量亦有所差异。PCR结束后一般可采用下述方法之一灭活Taq聚合酶:①100℃加热10min;②加入10mmol/L EDTA;③酚:氯仿提取,乙醇沉淀DNA。
