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        单链高分子量的担体DNA制备

        相关实验:酵母转化实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  将DNA溶于pH8.0的1×TE缓冲液,终浓度为10 mg/ml。于4℃搅拌过夜。
         
        2.  用一个大的超声探头,在75%的满功率下超声处理DNA 30 s,以降低DNA溶液的粘度。取1 μg DNA在0.8%琼脂糖凝胶上电泳,检查超声剪切后片段大小的分布。如有必要,可重复超声处理,直到获得适当的片段大小分布。片段大小范围在2~15 kb 之间,平均大小约为7 kb 是合适的。

        3.  用缓冲液平衡酚抽提1次,酚/氯仿抽提1次,最后用氯仿抽提1次。

        4.  加入1/10体积的3 mol/l,pH5.2的乙酸钠缓冲液,2.5体积的冰冷的100%乙醇沉淀DNA。
         
        5.  DNA沉淀用2×TE缓冲液重悬,最终浓度10 mg/ml。 
         
        6.  将担体DNA移至一个Pyrex耐热玻璃烧瓶中,在微波炉中加热煮沸2~3 min。

        7.  迅速置冰浴中冷却,用无菌试管等量分装后于-20℃冻存DNA。

        来源:丁香实验

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