• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        表观分子量的判定实验

        相关实验:单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.将目的蛋白和标准分子量蛋白上样到同一块 SDS-PAGE 平板凝胶中,按照方案 1 的步骤进行 SDS-PAGE。

        在同一块平板凝胶上进行目的蛋白和标准分子量蛋白的电泳,可以消除由于丙烯酰胺浓度和电泳条件不同而产生的差异。可以通过商业途径获得多种标准蛋白试剂盒,标准蛋白及其分子量的详细资料也可在 Weber 和 Osborn(1969)、Neville(1971) 以及 Hames(1990) 中找到。若要用此方法更精细地测定分子量,最好能采用不同浓度的丙烯酰胺凝胶(Ferguson,1964;Neville,1971)。关于在使用多种市售标准蛋白进行 SDS-PAGE 时,聚丙烯酰胺和交联剂两者浓度对蛋白迁移的影响,在 Makowski 和 Ramsby(1997) 中有详细讨论。

        2.电泳结束后,进行蛋白染色(方案 2?~7)。

        3.(可选或不选)在测量尺 F 值之前干燥凝胶。

        4.测量蛋白和示踪染料(通常是溴酚蓝)迁移的距离。

        5.计算相对迁移率(Rf 值):

        RF=蛋白迁移的距离/示踪染料迁移的距离

        6.用迁移率对已知 Mr 的半对数作图。凝胶中部各点应几乎在一直线上(见图 2.7)。

        7.通过未知蛋白的RF 值从曲线图上读出未知蛋白的 Mr。

        要点:每块胶应重新绘制标准曲线。

        表观分子量的判定实验

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序