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        949

           1、常规脱蜡浸入0.01mol/LPBS;
            2、用0.2mol/L盐酸处理5min;
            3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15min;
            4、分别用80%,95%和100%酒精脱水,室温干片;
            5、加PCR混合液25μL(10mmol/L Tris-HCl,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,各加200μmol/L dATP,dCTP,dGTP,1.5mmol/L dig-11-dUTP l.5μl,引物250ng,Taq DNA聚合酶2U),加盖片;
            6、94℃变性5min后置入65℃湿盒中5min;
            7、用0.1×SSC液,65℃洗5min;
            8、片于65℃ 10s~20s;用4×SSC-0.1%吐温20液42℃洗5min,2次;
            9、经Buffer I液洗后滴加20%羊血清封闭30min;
            10、加地高辛抗体复合物(1:500)室温下2h;
            11、BufferⅢ液洗5min;
            12、用BCIP-NBT显色1h~2h,在镜下控制,终止显色;
            13、用中性红或核固红衬染,酒精脱水,二甲苯透明,树脂封片

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