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        质粒的酵母直接转化

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        试验试剂:

        PLATE溶液: iZN ;40%聚乙二醇(PEG,分子量3350;Sigma P 3640);0.1mol/L 醋酸锂 g;10 mmol/L Tris-HCl (pH7.5);1 mmol/L EDTA;

        实验步骤:

        1、 用牙签从平板中挑取单菌落(直径2~3mm),转移到1.5ml的无菌离心管中。

        2、 将10μl载体DNA(100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀。(若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini-prep DNA”方法制得,则不需加载体DNA)。

        3、 加0.5ml PLATE溶液,振荡。

        4、 置于实验台上,室温培养4天。

        5、 置42℃下热激15分钟。

        6、 以8000~10000r/min离心10秒沉淀细胞,小心弃去上清液,将细胞轻轻悬浮到200μl无菌蒸馏水,使细胞悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板。

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