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        质粒的酵母直接转化

        相关实验:质粒的酵母直接转化

        最新修订时间:

        原理

        将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒;将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中,选择被转化的酵母;再将文库质粒转化到酵母中

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1、 用牙签从平板中挑取单菌落(直径2~3mm),转移到1.5ml的无菌离心管中。


        2、 将10μl载体DNA(100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀。(若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini-prep DNA”方法制得,则不需加载体DNA)。


        3、 加0.5ml PLATE溶液,振荡。


        4、 置于实验台上,室温培养4天。


        5、 置42℃下热激15分钟。


        6、 以8000~10000r/min离心10秒沉淀细胞,小心弃去上清液,将细胞轻轻悬浮到200μl无菌蒸馏水,使细胞悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板。

        注意事项

        严格按照顺序加入试剂

        常见问题

        在酵母菌、脉孢菌和植物细胞中转化的主要障碍是细胞壁。把细胞壁用酶消化后便能有效地转化。

        来源:丁香实验

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