经验分享｜生物发光成像的底物

荧光素酶的发光是酶促反应产生的自发光，不需要激发光，但需要底物荧光素。不同的荧光素酶所需的底物不同。例如，萤火虫荧光素酶的底物是 D-荧光素，海肾荧光素酶的底物是腔肠素。其中，D-荧光素的使用频率最多，荧光素在氧气、ATP 存在的条件下和荧光素酶发生反应，生成氧化荧光素，并产生发光现象。

目前市场上 D-荧光素主要有三种形式，D-荧光素（游离酸）、D-荧光素（钠盐）和 D-荧光素（钾盐）。这三种形式主要区别在于溶解特性，配成溶液后，其在绝大多数应用上都没有实质性的差别，整体来看，钾盐在活体成像中的应用文献明显多于钠盐和游离酸。

D-荧光素的发光动力学与注射 D-荧光素的浓度关系不大，需要根据动物体重进行注射，大部分已发表的文献中使用的荧光素浓度是 150mg/kg。