人体间期细胞X—小体的制备

一、原理
1949 年 Barr 等发现，在雌性体细胞中的两条 X 染色体有一条（或这条的大部分）处于凝集不活动状态，从而形成 X- 小体（或称 X- 染色质、性染色质、 Barr 小体）。进而发现，所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的 X 染色体，当在个用雌或雄体中，有多于 2 条 X 染色体时，在间期细胞内除一条外，其余均形成 X- 小体。
人类正常的男女体细胞中， 22 对常染色体并无区别，但其性染色体分别为 XY 和 XX 。女性的两条 X 染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态，可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中 X 小体阳性率约为 30 — 50% 。
二、仪器、用品及试剂
光学显微镜，恒温水浴箱；
牙签、载玻片、染色缸；
Carnoy 固定液（甲醇∶冰乙酸＝ 3 ∶ l ） 70% 乙醇，硫堇染液；
5N HCl ， 0.2% 甲苯胺兰染液。
三、操作步骤
（一）方法一
l ．取材、涂片：取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。
2 ．固定：涂片后立即 95 ％乙醇中固定 30 分钟（不可干燥）。气干。
3 ．染色：玻片在蒸馏水中冲洗几次后 5N HCl （ 22 ℃）水解 10 分钟，蒸馏水洗去多余 HCl ，硫堇染色 30 分钟。水洗。
4 ．镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在 75% 乙醇、 95% 乙醇中分色后再镜检。
（二）方法二
l ．取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。
2 ． Carnoy 固定液中固定 15 分钟。干燥。
3 ． 5N HCl 中 10 分钟。水洗。干燥。
4 ． 0.2% 甲苯胺兰染色 2 — 5 分钟。水洗。气干。
5 ．镜检。
四、注意事项
l ．涂片时应均匀涂成单层，取材细胞要多些。取材前应漱口。
2 ．镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察， X- 小体大小约为 1 μ m ，多位于细胞核边缘。
3 ．统计 X- 小体阳性率，计数应选 300 — 500 个细胞。
五、试剂
1 ．硫堇染液配方：
① 4% 硫堇原液： 4g 硫堇粉末置研钵中以 50% 乙醇 100ml 研磨溶解。过滤。
② Michaelies 缓冲液：醋酸钠 9.714g ，巴比妥钠 14.714g 加双蒸水至 500ml 。
③硫堇工作液（ PH5.7 ）： 0.1N HCl 32ml
Michaelies 缓冲液 28 ml
4% 硫堇原液 400ml
2 ．甲苯胺兰染液配方：
0.2g 甲苯胺兰粉末溶于 100ml 双蒸水中即可。