人体间期细胞X―小体的制备

 

<center> <table> <tbody> <tr> <td> <p class="MsoNormal">  </p> <p> <span><b><font>一、原理</font> </b><br /> <span> <font><span>    </span> 1949年Barr等发现，在雌性体细胞中的两条X染色体有一条（或这条的大部分）处于凝集不活动状态，从而形成X-小体（或称X-染色质、性染色质、Barr小体）。进而发现，所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体，当在个用雌或雄体中，有多于2条X染色体时，在间期细胞内除一条外，其余均形成X-小体。</font> </span><br /> <font><span>    </span> 人类正常的男女体细胞中，<span>22对常染色体并无区别，但其性染色体分别为XY和XX。女性的两条X染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态，可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中X小体阳性率约为30―50%。</span> </font><br /> <b> <font>二、仪器、用品及试剂</font> </b><br /> <font><span>    </span> 光学显微镜，恒温水浴箱；<br /> <span>    </span> 牙签、载玻片、染色缸；</font><br /> <span> <font>    Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸＝3∶l）70%乙醇，硫堇染液；<br />     5N HCl，0.2%甲苯胺兰染液。</font> </span><br /> <b> <font>三、操作步骤</font> </b><br /> <span><span> <font>    </font> </span> <font>（一）方法一</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>l．取材、涂片：取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>2．固定：涂片后立即95％乙醇中固定30分钟（不可干燥）。气干。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>3．染色：玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl（22℃）水解10分钟，蒸馏水洗去多余HCl，硫堇染色30分钟。水洗。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>4．镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再镜检。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>（二）方法二</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>l．取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>2．Carnoy固定液中固定15分钟。干燥。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>3．5N HCl中10分钟。水洗。干燥。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>4．0.2%甲苯胺兰染色2―5分钟。水洗。气干。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>5．镜检。</font> </span><br /> <b> <font>四、注意事项</font> </b><br /> <span><span> <font>    </font> </span> <font>l．涂片时应均匀涂成单层，取材细胞要多些。取材前应漱口。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>2．镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察，X-小体大小约为1μm，多位于细胞核边缘。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>3．统计X-小体阳性率，计数应选300―500个细胞。</font> </span><br /> <b> <font>五、试剂</font> </b><br /> <span><span> <font>    </font> </span> <font>1．硫堇染液配方：</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>①4%硫堇原液：4g硫堇粉末置研钵中以50%乙醇100ml研磨溶解。过滤。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>②Michaelies缓冲液：醋酸钠9.714g，巴比妥钠14.714g加双蒸水至500ml。</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>③硫堇工作液（PH5.7）：0.1N HCl 32ml<br /> <span>                          </span> Michaelies缓冲液28 ml<br /> <span>                          </span> 4%硫堇原液400ml<br /> <span>    </span> 2．甲苯胺兰染液配方：</font><br /> <span> <font>    </font> </span> <font>0.2g甲苯胺兰粉末溶于100ml双蒸水中即可。</font> </span></span></p> <p>  </p> <p>  </p> </td> </tr> </tbody> </table> </center>