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        人体间期细胞X-小体的制备

        互联网

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        一、原理

        1949年Barr等发现,在雌性体细胞中的两条X染色体有一条(或这条的大部分)处于凝集不活动状态,从而形成X-小体(或称X-染色质、性染色质、Barr小体)。进而发现,所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体,当在个用雌或雄体中,有多于2条X染色体时,在间期细胞内除一条外,其余均形成X-小体。

        人类正常的男女体细胞中,22对常染色体并无区别,但其性染色体分别为XY和XX.女性的两条X染色体中,有一条在间期呈现浓缩状态,可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中X小体阳性率约为30-50%.

        二、仪器、用品及试剂

        光学显微镜,恒温水浴箱;

        牙签、载玻片、染色缸;

        Carnoy固定液(甲醇∶冰乙酸=3∶l)70%乙醇,硫堇染液;

        5N HCl,0.2%甲苯胺兰染液。

        三、操作步骤

        (一)方法一

        1. 取材、涂片:取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。

        2. 固定:涂片后立即95%乙醇中固定30分钟(不可干燥)。气干。

        3. 染色:玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl(22℃)水解10分钟,蒸馏水洗去多余HCl,硫堇染色30分钟。水洗。

        4. 镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再镜检。

        (二)方法二

        1. 取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。

        2. Carnoy固定液中固定15分钟。干燥。

        3. 5N HCl中10分钟。水洗。干燥。

        4. 0.2%甲苯胺兰染色2-5分钟。水洗。气干。

        5. 镜检。

        四、注意事项

        1. 涂片时应均匀涂成单层,取材细胞要多些。取材前应漱口。

        2. 镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察,X-小体大小约为1μm,多位于细胞核边缘。

        3. 统计X-小体阳性率,计数应选300-500个细胞。

        五、试剂

        1. 硫堇染液配方:

        ①4%硫堇原液:4g硫堇粉末置研钵中以50%乙醇100ml研磨溶解。过滤。

        ②Michaelies缓冲液:醋酸钠9.714g,巴比妥钠14.714g加双蒸水至500ml.

        ③硫堇工作液(PH5.7):0.1N HCl 32ml

        Michaelies缓冲液28 ml

        4%硫堇原液400ml

        2. 甲苯胺兰染液配方:

        0.2g甲苯胺兰粉末溶于100ml双蒸水中即可。

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