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        siRNA制备方法比较

        互联网

        1088

        比较项目

         

        化学合成

         

        体外转录

         

        RNase III 降解 dsRNA

         

        siRNA
        表达载体

         

        PCR
        表达框

         

        材料需求

         

        21-mer RNA
        oligos(
        一对 )

         

        29-mer DNA oligos( 一对 )

         

        转录模版 (200-1000bp ,两侧带 T7 启动子 )

         

        55-60-mer DNA oligos( 一对 )

         

        ~50-mer DNA oligos( 一对 )

         

        全部制备 / 合成时间所需时间

         

        4 —2

         

        24 小时 DNA oligo 合成时间

         

        1 转录模版制备时间

         

        5 天以上 DNA oligo 合成时间

         

        ~ 6 小时 DNA oligo 合成时间

         

        个人所需操作时间

         

        几乎不需要

         

        中等

         

        中等

         

         

        中等

         

        是否需要验证和寻找最有效 siRNA

         

        需要

         

        需要

         

        不需要

         

        需要

         

        需要

         

        能否标记 siRNA ( 例如用于荧光显微镜分析 siRNA 进入细胞过程或者在细胞中的定位)

         

         

         

         

        不能

         

        不能

         

        转染的相对难易程度

         

         

         

         

         

         

        可筛选性 ( 例如抗生素筛选 )

         

        不可以

         

        不可以

         

        不可以

         

        可以

         

        不可以

         

        能否用于长效抑制

         

        不可以

         

        不可以

         

        不可以

         

        可以(抗生素筛选)

         

        不可以

         

        能否大规模制备

         

        可以

         

        有限

         

        有限

         

        可以

         

        有限

         

        检测总体转染效率

         

        不可以

         

        不可以

         

        不可以

         

        可以

         

        不可以

         

        每个基因的相对费用(不包含人力)

         

         

        中等

         

         

        中等

         

        中等

         

        取决于合成后是否包含纯化、去保护,以及厂家提供的是已经退火的即用型双链还是冻干的单链

         

         

         

         

         

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