拟南芥转化
互联网
6532
实验试剂
卡那霉素30mg/l (Columbia，LanDsberg)，Nossen需50mg/l
实验步骤
1) 建议在直径7厘米的培养杯里种5处，每处种几棵，萌发一周后，每处只留下一棵最好的苗。
2) 将萌发的植物培养至茎高约3厘米时，去除其顶生花序。注意要避免伤及腋生花序。去除顶生花序将刺激腋生花序的生长。转化必须在去除顶生花序4天后进行。
5) 制备好已转化了相应质粒的农杆菌菌液l0ml，在转化前一天，转入人瓶培养过夜，第二天取出使用时农杆菌液0.D600当在1.2到1.6之间。室温5000rpm离心15分钟。弃上清，将农杆菌沉淀悬浮十相应体积的渗透培养基里，使0.D600在0. 8左右。
6) 用喷雾器将菌液均匀喷洒在待转化植株上，移入恒温室竖直培养。
1) 筛选前一般都要消毒，先用70%乙醇浸泡2分钟，再用次氯酸钠溶液处理15分钟，在上述处理时要不停地悬浮种子，最后用无菌水洗四次。
2) 处理后的种子用Top aga均匀涂布在固体筛选培养基表面。一块150mm直径的平皿最多种1500棵。低温4度春化2到3天，移入恒温室培养。根据植物筛选抗性不同，来判断萌发的幼苗是否是转化子，一般卡那霉素筛选能够直观的通过黄绿苗来判断，而且一般萌发后2-3天即可判断出来，而潮霉素抗性的转化子不能通过黄绿苗来判断，需要在萌发后5-7天通过幼苗的发育来判断。
