免疫荧光技术简介

一些基本概念和基本知识：

1 荧光免疫测定技术的概念：将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。
2.技术分类：
  ⑴荧光抗体技术(荧光显微镜技术)
      抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判
      定结果的检测方法。

  ⑵ 免疫荧光测定技术：
      抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定
    荧光强度而推算被测物浓度的检测方法
3.荧光的产生：
          物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。
          这种物质，称为荧光素           
      由光激发所引起的荧光，为光致荧光
                            ------荧光免疫技术      
      由化学反应所引起的荧光，为化学荧光
                            ------化学发光技术
4.荧光素的荧光特性：

⑴ 停止供能，荧光现象随即终止
⑵ 对光的吸收和荧光的发射具高度选择性
      入射光波长<发射光波长
⑶ 荧光效率：           发射荧光的光量子数
          荧光效率=-------------------------------
                            吸收光的光量子数
  ⑷ 荧光猝灭现象：荧光素的辐射能力减弱
5.常见荧光素：
  
  ⑴ FITC
  ⑵ RB200
  ⑶ TRITC
  ⑷ 镧系：Eu、Tb
  ⑸ PE
  ⑹ 其它
常见荧光素的特性：
  ⑴ FITC：黄色结晶粉末，吸收光：490~495nm，
          发射光：520~530nm，明亮的黄绿色荧光。
  ⑵ RB200： 橘红色粉末, 吸收光570nm，发射光
                  595~600nm，橘红色荧光。
  ⑶ TRITC： 紫红色粉末，吸收550nm，发射光                 
                  620nm，橙红色荧光。
  ⑷ 镧系：Eu、Tb
  ⑸ PE：吸收光490~560nm，发射光595nm，红色
              荧光。
  ⑹ 其它：酶作用后产生荧光物质。
酶作用后产生荧光物质：
酶     底物     产物     激发光   发射光
Β-G     MUG     MU       360         450
AP     MUP     MU       360         450
HRP   HPA     二聚体     317       414     
6.合适荧光素的选择
  ⑴ 具有与蛋白质形成共价键的化学基团。
    荧光素-N=C +NH-蛋白质       荧光素-N-C-N-蛋白质
                  ‖   �                         �‖ �
                  S   H                           H S H
  ⑵ 荧光效率高，标记后下降不明显。
  ⑶ 荧光色泽与背景色泽对比鲜明。
  ⑷ 标记后能保持生物学活性和免疫活性
  ⑸ 标记方法简单、快速。
  ⑹ 安全无毒