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        酵母遗传学方法7:随机孢子分析

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        随机孢子分析

         

        1 )孢子形成

         

        1. 挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在 YPD 平板上,尽可能把细胞涂薄一些,在 30 ℃下培养 12 16 小时,超过 16 小时将明显降低孢子的形成率。

        2. 上午,用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞,转到含有 2.5ml 产孢培养基试管中,在 25 ℃下旋转振荡培养。

        3. 用光学显微镜检测孢子形成情况。要使 5 %以上的细胞形成孢子需花 2 10 天。

         

         

        2 )随机孢子

         

        4. 1ml 形成孢子的培养物转到 15ml 的锥形聚苯乙烯离心管,用医用离心机离心 5 分钟沉淀细胞。

        5. 彻底除去上清液,把细胞悬浮在 0.2ml 无菌水和 5 μ l β - 葡糖苷酸酶(约 500 个单位)。

        6. 30 ℃条件下旋转振荡培养 1 小时。

        7. 0.1ml (约 0.15 克)灭菌的 0.5mm 玻珠,在 30 ℃条件下旋转振荡培养 1 小时。

        8. 1ml 无菌水。

        9. 振荡 1 2 分钟,用光学显微镜检查子囊是否完全破裂。

        10.  4ml 无菌水。

        11.  用无菌水做 10 1 10 3 稀释度,在含有 60 μ g/ml 刀豆氨酸的 SC arg 平板上涂 200 μ l

         

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