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    技术和方案10 随机孢子分析

    相关实验：酵母遗传学方法实验

    最新修订时间：

    材料与仪器

    步骤

    丽 I . 孢子形成 1 ) 挑取一个将要生孢的二倍体单菌落接种在YPD平板上，尽可能把细胞涂薄一些，在 30°C下培养12〜16h ，超 过 16h 将明显降低孢子的形成率。 2 ) 次日挑取相当一火柴头量的细胞，转接到含有2.5m l产孢培养基的试管中，在 25°C 下摇床培养。 3 ) 用光学显微镜检测孢子形成情况。要 使 5 % 以上的细胞形成孢子需花2〜10天。 I . 随机孢子 4 ) 取 lm l生孢培养物转到15m l的锥形聚苯乙烯离心管，用医用离心机离心5m in沉淀 细胞。 5 ) 弃尽上清液，重悬细胞于含5^1矛葡萄糖苷酸酶（ 约 500U) 的 0.2m l的无菌水中。 6 ) 在 30°C条件下摇床培养lh 。 7 ) 加 0•lml (约0•15g) 灭菌的0. 5mm玻璃珠，在 30°C条件下摇床培养lh 。 8 ) 加 lm l无菌水。 9 ) 振 荡 1〜2min， 用光学显微镜检查子囊是否完全破裂。 10) 力 [ I 4ml无菌水。 11) 用无菌水做10—1〜1〇 _3的系列稀释，涂 20(^1在 含 有 60jug/m l刀豆氨酸的SC-arg 平板上。 材料和溶液 生孢培养基 l% KO Ac 0.025%葡萄糖 炊葡萄糖苷酸酶（Sigma G7770) 无 菌 0. 5mm玻璃珠 含 有 60/^g/m l刀豆氨酸的SC-arg平板

    来源：丁香实验

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