相关实验：有丝分裂重组和随机孢子分析实验
最新修订时间：2024-05-13
材料与仪器
步骤
来源：丁香实验
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![从 S D + ly s平板仔细挑取二倍体并点在S D + ly s和 YPD平板上。 第 6 天 检 查 S D + ly s平板鉴定4-1X 4-2二倍体。 L O H 晚上，用菌株4-1X 4-2二倍体接种5ml YPD， 用 菌 株 4 -2 单倍体接种5ml YPD作对照，在 30°C下振荡培养。 减 数 分 裂 重 组 为 制 备 菌 株 4 -1 X 4 -2 二倍体的孢子形成物，挑取二倍体接种在 YPD平板上，在 30°C下培养过夜。 第 7 天 突 变 和 L O H 将菌株4-1X 4-2 二倍体混合培养液在无菌试管中制成1 0 倍系列稀释 度。用 1〇〇4 的 10— \ 10— 2和 10— 3稀释液分别涂在SC +5-FO A 和 S O a rg + 刀豆氨酸平 板测定LO H 频率。同时，用 10(^1的 1CT4和 1(T5稀释液涂Y PD 平板，测定活细胞数 量。为了测定C A N ]和 U RA 3的基因的自发突变率，需把菌株4 -2 单倍体细胞制成类 似的稀释度。然后用lOOjul的 1CT1和 10— 2稀释液涂在SC +5-FO A 和 SC -arg+刀豆氨酸 平板。同样，也应取l 〇〇fxl的 1CT4和 1CT5稀释液涂YPD 平板以测定活细胞数，所有的 平板置于30°C培养。 减 数 分 裂 重 组 按 照 “技术和方案1 0 , 随机孢子分析” ，将 YPD 平板的菌株4-1X 4-2 二倍体转接到液体产孢子培养基中，置 25°C培养。 第 1 0 天 突 变 和 L O H 据选择性平板和YPD 平板的菌落数，计算菌株4-1X 4-2二 倍体和 菌株4-2单倍体CanR 和 5-FOAR 的频率。用多头接种装置（ frogger)，对每种药物抗性 菌 株 点 接 2 2 个 独 立 的 菌 落 在 SC + 5 - FOA、 SC-arg + 刀豆氨酸、 SC-met (为评估 HOM5 ) 和 YPD 平板上。如果没有足够菌株4-2的 菌 落 ，可以涂仅有 的，包括菌株4-1X 4-2 二倍体、 亲本单倍体菌株4-1和 4-2作为对照。 减 数 分 裂 重 组 检 查 4-1X 4-2培养物的孢子形成情况。如果培养物已经形成孢子， 照 “技术和方案1 0 , 随机孢子分析” ，进行酶解破开四分体，用随机孢子的稀释液涂 平板。 第 1 1 天 突 变 和 L O H 根据片状或点状菌株的生长，计 算 5-FO A平板上初筛CanR 菌株的 频率和在刀豆氨酸平板上初筛5-FOAR 菌株的频率。 第 1 3 天 使用多头接种装置，涂或点45个来自菌株4-1X 4-2 二倍体的独立的随机孢子菌落 到三块YPD 平板上以及下列平板上： SC-ura、 SC-his、 SC-met和 SC-arg+ 刀豆氨酸平 板各一块。包括菌株4-1X 4-2二倍体和亲本单倍体菌株4-1和 4-2作为对照。 在 YPD 平板上开始杂交测试菌株4 -3和 4-4 。](http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/08/A14707999855595c89ysndggpng_small.jpg)
