琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA

相关专题

 

【实验目的 】
通过实验掌握琼脂 糖凝胶电泳鉴定DNA的原理与方法。

【实验原理 】
琼脂糖是从海藻中提取出来的一种杂聚多糖，是由D型和L型半乳糖以α-1，3和β-1，4糖苷键相连形成的线状高聚物（如下图所示）。琼脂糖遇冷水膨胀，溶于热水成溶胶，冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的凝胶。
琼脂糖凝胶电泳 是分离、鉴定和纯化DNA片段最为常用的方法之一，这种方法简便易行。而且琼脂糖可以灌制成各种形状、大小和孔径，在不同的装置中进行电泳，如果有必要，还能够从凝胶中回收DNA谱带。
琼脂糖凝胶的分离范围较广，选择不同凝胶浓度和装置，从50个碱基对到几兆不同长度的DNA都可以实现分离。使用电场强度和电泳方向恒定的水平板琼脂糖凝胶电泳的方法，可以很好的分离长度在50-20,000 bp 的DNA片段。

DNA在琼脂糖凝胶中的迁移率受多种因素影响。例如DNA分子 的大小；琼脂糖的浓度；所加电压等等。DNA片段越长，泳动速度越慢，而且泳动速度与电场强度成正比。一个给定大小的线性DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶中迁移率不同，DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
用低浓度的荧光染料如溴化乙啶染色后，凝胶中的DNA可以直接被检测出来。紫外灯下可以直接检测到20pg的双链DNA。
【实验材料 】
1. 实验器材
水平板电泳槽；灌胶模具及梳齿；电泳仪；55℃水浴；沸水浴；微量移液器
2.实验试剂
（1）DNA样品；DNA标准分子量标记物；琼脂糖；1x电泳缓冲液TBE；6x样品缓冲液
（2）溴化乙锭：水中加入溴化乙啶，搅拌数小时至溶解。将配好的10 mg/ml溴化乙啶溶液装在棕色瓶中，室温保存，使用时稀释至0.5μg/ml。
缓冲溶液配制表

缓冲溶液

工作溶液

储存溶液（每升）

TBE

0.5x

5x

 

 

0.045mol/L Tris-硼酸

54 g Tris 碱

 

 

0.001mol/L EDTA

27.5g 硼酸

 

 

 

 

20ml 0.5mol/L EDTA (pH8.0)

6x样品缓冲液

0.2% 溴酚蓝

储存温度4℃

 

 

50% (w/v) 蔗糖水液