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        性途径(结合)诱导

        相关实验:性途径(结合)诱导实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        培养物准备

        1. 每种交配型都在装有 100 ml 培养基的 1 L 培养瓶中接种 5 ml 最近转接过的短期贮存的四膜虫,用铝箔或棉絮塞子盖上培养瓶。

        2. 30℃ 培养至对数后期,通常这一培养为静止培养。在此条件下,细胞将在 24 小时内达到所需密度。

        在 10 mmol/L Tris 中使细胞饥饿起始

        3. 在 pH 7.4 的 10 mmol/L Tris 中低速离心洗涤沉淀细胞,弃上清,在 Tris 中轻悬细胞。低速离心,再弃上清。

        4. 在 10 mmol/L Tris 中重悬每种交配型细胞,使终浓度为 2X105~2.5X105 细胞/ml。等分为 100 ml 倒入 1 L 的培养瓶中。确定保持交配型分离。

        5. 用铝箔或棉絮塞子盖上培养瓶,30℃ 不振摇过夜培养。

        细胞共刺激和配对形成

        6. 轻微综合相同交配型的细胞并检测浓度。

        7. 混合数量相等的相反交配型的细胞,在每个 1 L 培养瓶中等分装入 50~80 ml,用铝箔或棉絮塞子盖上。

        8. 应使细胞在 30℃ 静止放置,直到达到所需生长期。

        9. 至所需生长期,于 1500~2000 g 离心 5 分钟收获交配细胞。细胞核的形态、数量等对确定生长期是便利的特征。

        10. 如配制分离的细胞核,在培养基中重悬细胞,浓度为 2X106 细胞/ml,-20℃ 冷冻贮存或直接使用。

        来源:丁香实验

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