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        可溶性抗原的制备(菌脂多糖的制备实例)

        互联网

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        脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁的组成成分,所以抗脂多糖抗体的制备可用革兰氏阴性细菌菌体抗原来制备。
        (一)热酚提取法
        原理是将细菌悬液加于热酸——水混合液中,冷却,离心混合液可分为水溶液层,内含水溶性脂多糖及核酸等及酸层、内含蛋白质。近年来发现在酸层中也含糖类。经离心后沉淀含细胞残体。
        1 细菌浓悬液用盐水经2500r/min,20min离心洗涤一次。
        2 将沉淀的菌混匀于蒸馏水中,放66℃水浴,然后滴加等量的90%热酚溶液(预热至66℃),边加边摇,而后在66℃水浴中搅拌25min。
        3 在水浴中冷却,于4℃冰箱过夜。
        4 以2000r/min离心15min。
        5 将上层水溶液吸到另一 试管 中。
        6 剩下的酚层及残渣组分可再加上述同量水在热 水浴 中搅拌30min,冷却,离心,取上层水溶液。将两次提的水溶液混合,置透析袋中于生理盐水中透析2天,其间换几次盐水,以除去酚。
        7 透析后的水溶液层经浓缩(如用聚乙二醇在透析袋外层涂抹以除去水分)。即成粗制脂多糖,于冰箱内保存备用。
        (二)超声波处理法
        1 获得的菌液经2500r/min,20min离心洗涤1-2次,将沉淀配成2倍于湿菌浓度的浓菌液。
        2 用超声波发生器中频(约相当于12000cps)处理20min。
        3 处理液经3000r/min,离心30min,吸取上清液即为脂多糖抗原。置4℃冰箱保存备用。
        (三)煮沸法
        将培养后得到的浓菌液沸 水浴 煮沸2h。置冰箱静置两星期以上(使菌体残渣自由下沉)。3000r/min离心30min,取上清夜即为粗脂多糖抗原,置冰箱中保存备用。
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