• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        凝胶回收常见问题分析

        互联网

        8136
        未回收或回收率低

        1. 胶块未全部溶解.溶解凝胶时应置于55℃水浴,不断上下颠倒,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤。

        2. 胶块太大(>400 mg).如果需要处理的胶块太大,应先将其切成小块,做两次回收或选用大量型回收 试剂 盒。

        3. 电泳缓冲液pH值太高.硅胶膜在高盐及低pH值(pH≤7.5)时可结合DNA,在低盐及高pH值(pH≥8)条件下洗脱。如果电泳缓冲液pH值太高,会导致DNA无法结合或降低结合率。可在溶胶后加入 10μl KAc(pH5.0),将pH值调至7.5以下。

        4. 漂洗液中未加无水乙醇.第一次使用前应在漂洗液中加入无水乙醇。漂洗液每次用后应拧紧瓶盖,以免乙醇挥发,降低回收率。

        5. 洗脱缓冲液不合适.DNA只在低盐溶液中才能被洗脱,如洗脱缓冲液EB (10 mM Tris·Cl, pH8.5)或水。洗脱效率取决于pH值。最大洗脱效率在pH 7.0-8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内。

        6. 洗脱缓冲液未加在离心柱中间尤其使用较少量洗脱缓冲液时,应加在离心柱正中间,并放置1-2分钟,再离心。

        7. 加入异丙醇后产生雾状和凝胶状沉淀。这种现象可能是盐沉淀,颠倒混合样品沉淀就会消失。 或者是胶块没有完全溶解,此时可将混合物加入离心柱,离心,在离心柱中再加入0.5 ml 溶胶液室温放置1min,离心即可出去剩余 琼脂 糖凝胶。


        回收后的片段无法用于后续实验,如连接等

        1. 洗出液中含乙醇。洗脱时硅胶膜或硅胶树脂上有漂洗缓冲液残留,会使洗脱产物中含有乙醇,影响下游操作。在洗脱前可通过再次离心或置于50℃烤箱中5-10分钟,彻底去除漂洗缓冲液。

        2. 洗出液中污染有 琼脂 糖。凝胶未全部溶解。

        3. 洗脱产物含有ssDNA,表现为在琼脂糖电泳上呈小弥散带。将洗脱产物95℃加热 2 min,慢慢冷却到室温,使单链DNA重新退火复性即可。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序