凝胶回收法
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原理
从琼脂糖凝胶电泳中回收纯化DNA 片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统， 结合DNA 制备膜技术， 具有高效快速的特点。本试剂盒纯化DNA 片段纯度高，完整性好。可直接用于连接反应， PCR 扩增。
材料与仪器
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 |
步骤
1. 将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶切下，并放入2.0 ml离心管中。
2. 按1：3的比例（凝胶质量毫克数：融胶液体积微升数）加入Extraction Buffer。（每次加入的ExtractionBuffer最大体积不宜超过1.2 ml）。例如：100 mg凝胶应加入300 μl ExtractionBuffer。
3. 于恒温水浴或金属浴中55 ℃孵育，直到凝胶融化。低熔点凝胶可于50 ℃孵育，一般孵育时间不多于10分钟，孵育过程中每隔2-3分钟混匀一次。
4. 可选：按1：1的比例（凝胶质量毫克数：异丙醇体积微升数）加入异丙醇，并混合均匀。一般大于120 bp DNA片段，不需要加异丙醇。
5. 将混合液全部转移到Spincolumn内，于6，000 g离心1分钟，并弃去接液管内液体。如混合液体积大于750 μl可先转移750 μl，其余的液体待离心弃液后，再转移。
6. 向Spincolumn内加500μlExtractionBuffer，于12，000 g离心30-60秒，并弃去接液管内液体。
7. 向Spincolumn内加650 μl WashBuffer，于12，000 g离心30-60秒，并弃去接液管内液体。
8. 重复第7步一次。
9. 再次于12，000 rpm离心1分钟，然后将Spincolumn转移到无菌的1.5 ml离心管中。如不进行该步离心，则无法保证离心柱内残液被彻底清除。
10. 向Spincolumn内加50μlElutionBuffer、去离子水或TE溶液，并于室温静置1分钟。可根据实验的实际需要决定Elution Buffer用量。
11. 于12，000 g离心1分钟，1.5 ml离心管内溶液中含有目的DNA片段。
12. 回收的DNA可直接用于各类下游分子生物学实验，如果不立即使用，请保存于-20 ℃。
注意事项
1. 使用前按瓶身标签标明体积加入无水乙醇，并将其混匀。
2. 结合液用好后立即盖好盖子。
3. 本试剂盒最适洗脱液体积为50 μl，洗脱液用量可根据客户实验具体情况灵活调整。
来源：丁香实验
