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        芯片常见问题分析

        互联网

        1838

        1、芯片实验和定量PCR的优劣比较?

        基因表达谱芯片实验可以对大量基因一次性进行定量研究,定量PCR则对大量基因需逐一进行定量研究。

        2、在芯片制作过程中的PCR原液是否可以为客户保存?

        可以抽干冷冻保存一年。

        3、可否用DNA和芯片杂交?

        不可以,因为芯片上的样品是cDNA而真核基因DNA中普遍存在內显子,核酸杂交无法顺利进行。

        4、对于临床症状不明显的的遗传病,如何取样?

        可以从病人抽取血样或者骨髓。

        5、如何保存血样?

        将血样中血细胞分离出来,然后-80℃低温保存。

        6、脱落细胞是否都是死亡的细胞,,其中是否可以抽提mRNA?

        不完全是死亡的细胞, 但是mRNA的含量比较少, 建议最好用正常细胞抽提mRNA。

        7、完成一张芯片的实验,需要的细胞的量是多少?

        需要5×106的细胞量。

        8、提供的电泳图和OD值如何评价mRNA的质量?

        电泳图可以分析mRNA和总RNA是否降解,OD值可以判断纯度。

        9、是否可以将同一症状的病例混合后抽提,看共性表达?

        可以。

        10、芯片是否可以重复使用?

        不可以。

        11、杂交后的芯片如何保存?

        避光常温保存几个星期。 


        12、在实验前期,如何定参照物?

        根据实验设计来确定使用共同参照物还是各自的参照物。

        13、如何消除基因芯片实验中的个体差异?

        可以使用同一样品重复芯片实验,取其共性,获得可靠的数据结果。

        14、芯片在杂交过程中为什么会发生非特异性杂交, 如何降低?

        这是由于DNA碱基错配造成,提高芯片杂交后洗脱液的温度可以降低非特异性杂交。

        15、芯片上基因cDNA是从什么组织中取得的?

        芯片上基因cDNA来源于美国I.M.A.G.E.项目,是从人的各种组织中分离确定的,并且每个基因cDNA具有明确功能定义的,与其它基因不相重复的。

        16、芯片上有多少条有效基因?

        目前芯片上的有效基因数目最多有7500条,每条基因都有明确的功能定义,不相重复。

        17、基因表达谱芯片是如何进行分类的?

        基因表达谱芯片是根据芯片的用途来分类的,每种芯片上包括与特定用途相关的基因。

        18、表达谱芯片是否可以按照器官来进行分类?

        不可以。

        19、基因芯片的假阳性率是多少?

        一般控制在1%~2%。

        20、芯片制作中如何控制芯片的质量?

        控制芯片的质量主要要以下几个方面:玻片的选择、点样的规范、固定率、芯片的背景、有效的避免融点等。

        21、实验结果中的荧光信号散点图有何意义?

        可以直观反映杂交后的差异表达与正常表达的比率,显示相关度和实验结果的好坏。

        22、扫描背景不清楚会对实验结果产生什么影响?

        会导致实验结果混乱,而导致实验失败。如果是杂质污染等原因造成,可以通过洗片解决;如果是mRNA不纯,则需要重新抽提。

        23、实验失败有几种原因?

        mRNA的降解,MRNA的纯度差,反转录酶失败,标记效率低,CY3容易见光降解。

        24、得到实验的结果后,可以进行那些研究的工作?

        可以通过基因的差异表达,寻找目标基因,进行聚类分析,对差异基因进行进一步的功能研究。

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