PCR-SSP法在HLA-B27检测中的应用研究

广东佛山市中医院检验科 　　庄健海

 

摘要 应用序列特异引物聚合酶链反应（PCR-SSP）技术对181例临床标本进行HLA-B27检测，同时作血清学试验。结果：PCR方法和血清学方法分析结果基本相符，PCR分型无假阳性及假阴性，血清学方法有1例假阳性及1例假阴性，表明PCR方法灵敏度高、特异性好、准确、较之血清学方法更适合于临床。

关健词 PCR-SSP HLA-B27

 

人类白细胞抗原B27（HLA-B27），是诊断强直性脊柱炎的指标之一，对强直性脊柱炎的早期诊断和预后以及对类风湿关节炎的鉴别诊断起着极其重要的作用。以前国内大多采用血清学方法对HLA-B27进行检测，近来国内外有报道应用PCR技术对HLA-B27进行检测，具有简便快速，灵敏度高，特异性好，准确等特点。2001年3-6月，我科对全部进行HLA-B27检测的病人运用PCR-SSP法进行检测的同时，也进行了血清学检测，现报告如下：

 

1. 材料与方法

 

1. 1材料

 

1.1.1引物特异性引物有2个。B27引物序列为：P _{1 5} ¹ -CAG,TCT,GTG,CCT,TGG,CGT,TGC;P ₂ 5 ¹ -GGC,TAC,GTG,GAC,ACG,CT.PC产物为144bp.5 ¹ -TCA,CGG,ATT,TCT,GTT,GTG,TTT,PCR产物429 bp.以上引物由美国G&T Biotecli公司提供

。

1.1. 2临床样本 181份来源于临床进行HLA-B27检测的患者

。

1.1. 3PCR扩增仪 购自上海复星公司,型号PTC-100

。

1.1.4电泳仪 上海西巴斯生物技术公司研制,型号DY-A

。

1.1. 5HLA-B27分型血清板 由广州医学院神经研究所提供,含阴阳性对照

 

。

1.1. 6倒置显微镜 日本奥林巴斯光学 仪器 有限公司研制的CK-2

。

1.2. 方法

 

1.2.1摸拟DNA提取 取EDTA抗凝静脉血0.3ml 采用快速酚氯仿抽提

 

DNA。

 

1.2.2PCR扩增PCR反应体至25μl，其中B27引物2μmol/L，

内对照物1μmol/L,Mgcl2 2mmol/L 17.5mmol/Ltric,Kcl37.5mmol/L,

 

DNTP200μmol/L,5%Dmso,Taq酶0.5μ模板DNA22.5μl

。