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        常用贮存液的配制

        互联网

        1996

        溶液

        配制方法

        说明

        30%丙烯酰胺

         

        将29g丙烯酰胺和1g N,N -亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中,加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌 ,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

         

        小心:丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。

         

        在贮存期间,丙烯酰胺和双酚烯胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸。

         

         

         

        见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

        40%丙烯酰胺

         

        把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N -亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。

        放线菌素D

         

        把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD 440 值。放线菌素D(分子量为1255D)纯品在水溶液中的摩尔消光系数为21900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。

        小心:放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制溶液时必须戴手套并在化学通风橱内操作,而不能在开放的实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

         

        药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等的添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。

        0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)

        在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调PH值至7.0,用蒸馏水定容至1ml,分装成小份保存于-70℃。

         

        10mol乙酸铵

        把770g乙酸铵溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。

         

        10%过硫酸铵

        把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。

         

        BCIP

         

        把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

         

         

        2×BES缓冲盐溶液

         

        用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCI和0.027g Na 2 PHO 4 ,室温下用HCI调节该溶液的pH值至6.96,然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。

         

         

        1mol/L CaCI 2

         

        在200ml纯水中(Milli-Q水或相当级别的水)溶解54g CaCI 2 ·6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

         

         

        2.5mol/L CaCI 2

         

        在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCI 2 .6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

        制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用纯水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。

        1mol/L二硫苏糖醇(DTT)

        用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

        DTT或含有DTT和溶液不能进行高压处理。

         

        0.5mol/LEDTA(PH8.0)

         

        在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H 2 O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需20g NaOH颗粒),然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。

        EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0时,才能完全溶解。

         

        溴化乙锭(10mg/ml)

         

        在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。

        小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。这些溶液使用后应进行净化处理。

        2×HEPES缓冲盐溶液

         

        用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCI、0.074g KCI、0.027g Na 2 HPO 4 ·2H 2 O、0.2g葡聚糖和1g HEPES,用0.5mol/L NaOH调节pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。

         

         

        IPTG

         

        IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3D),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

         

         

        1mol/L乙酸镁

        在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L,过滤除菌。

         

        1mol/L MgCI 2

        在800ml水中溶解203.3g MgCI 2 ·6H 2 O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。

        MgCI 2 极易潮解,应选购小瓶(如100g) 试剂 ,启用新瓶后勿长期存放。

        β-巯基乙醇(BME)

        一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃

        BME或含有BME的溶液不能高压处理。

         

        NBT

        把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

         

        酚:氯仿

         

        把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·CI(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01ml/L Tris·CI(pH7.6)液层,保存于4℃。

        小心:酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的皮肤部位应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

        10mmol/L

         

        苯甲基磺酰氟(PMSF)

         

        用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml (10mmol/L),分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml贮存液(100mmol/L)。

         

        小心:PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险,一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

         

        PMSF在水溶液中不稳定,应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmol/L的PMSF水溶液的半寿期大约为35分钟。这表明PMSF溶液调节为碱性(PH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。

        磷酸缓冲盐(PBS)

         

        在800ml蒸馏水中溶解8g NaCI、0.2g KCI、1.44g Na 2 HPO 4 、 0.24g KH 2 PO 4 ,用HCI调节溶液的pH值达7.4,加水定容至1L,在15Ibf/in 2 (1.034×10 5 Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟。保存于室温。

         

         

        1mol/L乙酸钾(PH7.5)

        将9.82g乙酸钾溶解于20ml纯水(Mill-Q水或相当级别的水)中,用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃。

         

         

        乙酸钾溶液(用于碱裂解)

        在60ml 50mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

         

         

        3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)

        在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

         

         

        5mol/L NaCI

        在800ml水中溶解292.2g NaCI加水定容至1L,分装后高压灭菌。

         

        10%十二烷基硫酸钠(SDS)

        在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用。

        SDS的微细晶粒易于扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌。

        20×SSC

         

        在800ml水中溶解175.3g NaCI和88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/L NaOH溶液调节pH值至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

         

         

        20×SSPE

         

        在800ml水中溶解175.3g NaCI、27.6g NaOH溶液调节pH值至7.4(约需6.5ml 10mol/L NaOH),加水定容至1L,分装后高压灭菌。

         

         

        100%三氯乙酸

        在装有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(w/v)TCA。

         

        1mol/L Tris

         

        在800ml水中溶解121.1g Tris碱,加入浓HCI调节PH值至所需值。

         

        PH HCI

         

        7.4 70ml

         

        7.6 60ml

         

        8.0 42ml

         

        应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

        如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃,并制备质量更好的Tris。

         

        尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

         

        Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高1℃,PH值大约降低0.03个单位。例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃和37℃的pH值分别为9.5、8.9和8.6。

         

        Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/L Tris)

         

        在800ml蒸馏水中溶解8g NaCI、0.2g KCI和3g Tris碱,加入0.015g酚红并用HCI调pH值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在15lbf/in 2 (1.034×10 5 Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟,于室温保存。

         

         

        X-gal

         

        X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的贮存液。保存于玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的 试管 须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌

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