人类基因组研究--大片段外源DNA克隆体系

(1) 酵母人工染色体克隆体系(YAC)

这种克隆体系是20 世纪80 年代末发展起来的，并于1990 年底渐趋完善的大片段外源DNA 克隆体系。插入YAC 载体的外源DNA 片段可达200  l 000kb 甚至更多，并能稳定复制。现在YAC 已成为构建复杂基因组的有力手段。

(2) 黏粒克隆，n 噬菌体和细菌人工染色体

黏粒克隆的出现早于YAC ，其主要特点是插入的外源片段比入噬菌体DNA 大得多。因此在筛选基因文库时可以减少一半工作量。P1 噬菌体的溶源状态奇特，不整合到宿主的染色体上，像质粒一样作为一个自主复制单位游离于宿主染色体以外。可以用于克隆75 ―110kb 的外源DNA 片段。电穿孔技术的发展为提高大质粒的转化效率创造了条件，已经可以构建和转化几十到几百kb 的细菌人工染色体克隆(BAC) 。

(3) 构建重叠度最低的连续克隆系

构建能覆盖每条人类染色体而重叠度又最小的连续克隆系，是进行大规模基因组DNA 测序的基本条件。由于这一做法很花时间，当测序中心将大规模测序计划上升至每年75Mb 或更多时，连续克隆系的构建速度可能跟不上测序产出的速度。1996 年，有人提议对高覆盖率的BAC 文库的克隆进行末端测序，形成顺序标签接头(sequencetaggedconnector ，STC) ，利用STC 与克隆间的对应关系，可以在计算机上快速地发现局部连续克隆系。