免疫亲和层析使用的抗体的选择
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免疫亲和层析使用的抗体的选择
通过实验比较和经验积累才能发现最适合用于免疫亲和层析的抗体（见表2-1）。这意味着没有轻而易举的捷径能选择到最佳的抗体，最好的方法就是进行预实验，来初步测试这些抗体的效果。可用不同的共价交联微珠进行免疫沉淀试验，然后通过免疫印迹法测定结合的抗原量；另一种方法是将抗原溶液通过小型层析柱，然后用免疫印迹的样品缓冲液进行洗脱。一旦确定与抗原结合性能良好的抗体后，下一步就应用不同的洗脱条件进行试验，以找到一种洗脱峰形较好的抗体。
如果通过预实验发现使用的抗体不适合免疫亲和层析，较好的解决方法是用一个已知特性的表位分子作为标记蛋白，用其他的抗体来捕获此抗原表位。先构建一个包括有该表位分子和目的分子的融合蛋白表达载体，然后表达融合蛋白，后者可以用针对表位的特异性抗体进行分离。
免疫亲和层析的抗体的选择
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多克隆抗体
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单克隆抗体
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信号强度(抗体结合容量
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非常好
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视抗体而异，但应该非常好
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特异性
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非常好
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非常好，但某些抗体有交叉反应
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优点
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洗脱峰形易分辨(己知）
特异性强
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应用不受限制，特异性强
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缺点
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制备困难，应用受限
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需要筛选合适的抗体
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注：不推荐将未经纯化的多克隆抗体或混合的单克隆抗体用于免疫亲和层析。
