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        离子交换层析介质和层析柱的选择

        相关实验:离子交换层析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  离子交换凝胶的选择依据:

        (1)根据蛋白质的pH只稳定范围。蛋白质在等电点pI以上pH稳定时选择阴离子交换凝胶介质,在pI以下pH的稳定时,则选用阳离子交换凝胶介质。

        (2)根据特分离蛋白质的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白,选用如DEAE-Sephacel和DEAE-Sepharose样凝胶;更大的分子,用Sephadex A-25或C-25。

        2.  柱子大小取决于听用凝胶的结合容量,使用最频繁的是1 cm、2 cm、2.5 cm 直径,柱长通常少于之20 cm 对成分复杂的样品,用更大的柱子,

        3.  有商品供应的预装的FPLC离子交换柱可用。它们是Pharmacia的mono-Q(阴离子)和Mono-Q(阳离子)柱,有三种大小尺寸:0.5 mmx5 cm(25 m样品)、1 cmx10 cm(200 mg 样品)和 1.6 cmx10 cm(500 mg 样品)。

        来源:丁香实验

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