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        PCR-SSO结果显示与结果分析

        互联网

        2097
        PCR-SSO 结果显示与结果分析
         
        仪器和试剂
        (1)         感光胶片
        (2)         带有增感屏的暗合
        (3)         X光片冲洗试剂和设备
         
        操作步骤
        (1)         洗膜完毕后,用塑料薄膜将其包好,与感光胶片一起装入带有增感屏的暗合中,在低温冰箱中进行放射自显影。曝光时间需要摸索,通常为数十分钟至数天,视探针的放射性比活和洗膜程度而定。
        (2)         曝光完毕后,在暗室中将感光胶片取出,常规方法进行显影和定影,观察结果。
         
        【注意事项】
        放射自显影完毕后,尼龙膜上的探针可以用0.1N NaOH溶液洗脱,以便用其他探针杂交,但要求在杂交之后的整个实验过程中,尼龙膜要保持湿润,不能干燥。
         
        结果分析
        (1)         在每张尼龙膜上应有相应SSO探针的阳性和阴性DNA作为对照,其杂交信号应该具有明显的差异。
        (2)         分析杂交结果时,通过杂交的信号强度(注意与对照DNA的信号比较),一般可以判断阳性杂交的样本。如果样本DNA能够与某种SSO探针杂交,说明样本具有该SSO杂交的DNA序列,即某种(或某几种)HLA型别。注意某一种SSO探针可能与不同型别的DNA样本杂交。
        (3)         每一种HLA型别的样本与特定探针组合的杂交格局取决于所用探针的组合,当根据不同实验目的选用不同的SSO探针组合时,分析结果应视具体情况而定。
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