免疫荧光组织化学基本原理及荧光抗体再染色

免疫荧光组织化学基本原理及荧光抗体再染色

 

    免疫荧光组织化学(immunofluorescence histochemistry)或免疫荧光细胞化学(immunofluorescence cytochemistry)是将荧光作为标记物的免疫组织化学技术。1942年，Coons等首次报道用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体，检查小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原，从此开创了免疫荧光组织化学技术的先河。随着荧光标记技术和单克隆抗体技术的不断发展和激光扫描共聚焦显微镜的应用，使免疫荧光组织化学的特异性、快速性和在细胞、分子水平定位的敏感性与准确性大大提高。它能将生物样品形态、功能和代谢密切结合，在细胞、亚细胞水平原位检测抗原分子，这是其他任何生物技术难以取而代之的。故目前免疫荧光组织化学技术已成为生物学、基础医学和临床医学各学科领域常用研究方法之一。

 

    免疫 荧光组织化学技术是用免疫荧光技术检测细胞或组织内抗原或半抗原物质的方法。根据抗原抗体反应原理，先将已知抗体(或抗原)标记荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光标记物作为分子探针与组织细胞内的相应抗原(或抗体)反应，在细胞或组织中形成含有荧光素的特异性抗原抗体复合物，这种复合物上的荧光素受激发光照射而发出各种颜色荧光，利用荧光显微镜观察，即可对组织细胞中的抗原或抗体进行定性、定位乃至定量研究。蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受体及病原体等，凡能作为抗原或半抗原的物质均可用免疫荧光组织化学技术检出。

 

    若切片或其他标本经某种荧光抗体染色后，未获得阳性结果，而又疑有另外的病原体存在时，可用相应的荧光抗体再染色。

     有时存档蜡块不能再用以切片，可用存档的HE染色标本，褪去盖片和颜色，再进行免疫荧光或其他免疫细胞化学染色。  

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