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- 详细信息
- 用户评价
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
充足
- 英文名：
Exosupur® EV Re-purification Pocket Column
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京恩泽康泰生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃保存
- 规格：
0.1ml*6pcs
一、产品介绍：
Exosupur®外泌体二次纯化试剂盒在分子筛SEC的基础上增加了多模式吸附功能，具有纯度高、回收率高、高效除杂、可重复性强、外泌体完整性好、操作简单、对设备要求低等优点，可在45min内完成外泌体的分离纯化。
二、产品规格：
三、产品应用：
1. 染色后的外泌体进行游离染料的去除；
2. 荧光抗体标记后的外泌体进行游离荧光抗体的去除；
3.负载小分子后的外泌体，进行游离小分子的去除；
4. 对于纯度很低的EV粗纯物的进一步纯化以提升纯度。
四、产品优势：
1. 操作简便：无需特殊设备，直接孵育离心便可完成外泌体的分离，动手时间15min；
2. 颗粒回收率高：二次回收效率仅收E1组分便可回收超过60%的外泌体颗粒；
3. 除杂效率高：对于游离染料、小分子、杂蛋白等的去除效率超90%；
4. 对样本无稀释作用：只收集E1样本，不会对样本造成稀释；
5. 性价比高：可对纯化柱进行清洗再生，重复5次使用；
五、产品特点及数据
1.产品操作方法
2.颗粒回收效率高
对不同体积的荧光孵育后的外泌体进行上样收集E1和E2，测定颗粒数，结果如下图1，上样100μl的情况下，颗粒总回收率（E1+E2的颗粒数/上样颗粒数）近80%。
图1.Exosupur®袖珍柱纯化荧光外泌体的颗粒回收效率
3. 杂质去除效率高
对荧光标记后的外泌体进行不同体积上样，收集E1和E2，并经酶标仪检测荧光值，计算E1（1-E1荧光值/上样荧光值）或E2（1- E2荧光值/上样荧光值）组分的游离染料去除效率，上样100ul情况下去除效率超99%。
图2. Exosupur®袖珍柱纯化荧光标记外泌体的游离染料去除率
4. 荧光染色外泌体纯化相关实验测试
考虑到荧光染料标记外泌体进行体内外示踪是外泌体科研工作者几乎都要涉及的实验，但常规使用超滤等方法去除游离荧光染料时效果不佳，游离染料残留较多。我们将荧光染料标记外泌体后进行Exosupur®袖珍柱二次纯化的一些参数进行了进一步测试，主要测试了亲脂性荧光染料浓度是否影响游离染料去除效果，和重复使用是否影响颗粒回收率。
以不同浓度染料（2µg/ml-200µg/ml）分别上样100µl到Exosupur®袖珍柱，收集E1，酶标仪检测染料原液和回收液E1的荧光值，计算染料去除率，如图3所示。可见，染料浓度在10µg/ml以上时，Exosupur®袖珍柱的游离染料去除率稳定在98-99%以上。
图3. 不同浓度荧光染料上样对Exosupur®袖珍柱杂质去除率的影响
分别使用5µg/ml和25µg/ml的亲脂性荧光染料标记外泌体后，上样100µl到Exosupur®袖珍柱，收集E1，通过纳米流式测定颗粒数，计算颗粒回收率，将Exosupur®袖珍柱再生后继续重复几次实验，如图4所示。可见，不管使用低浓度还是中高浓度荧光染料标记的外泌体，使用Exosupur®袖珍柱进行几次重复实验，颗粒回收率相对较稳定，约在60%以上。
图4. Exosupur®袖珍柱使用次数对颗粒回收率的影响
5. 外泌体表征
经Exosupur®二次纯化后的外泌体进行三阳一阴WB检测和电镜TEM检测，显示不影响其生物学特征。
图5. Exosupur®袖珍柱纯化样本三阳一阴外泌体标志物分析
图6. Exosupur®袖珍柱二次纯化后的TEM电镜分析
六、常见问题
Q：该产品跟Exosupur®其他的分离试剂盒有何区别?
A：该产品在原理上有升级，更适合微量样本的分离，处理样本体积为0.1~0.5ml，主要用于外泌体的二次纯化。其他SEC为原理的Exosupur®试剂盒主要用于大体积样本的分离，处理样本体积为0.2ml~10ml不等。
Q：上样量到底如何选择？
A：不同分离目的、不同样本体积的分离参数见图1-4，可以根据各自实验中的目的选择更高收率还是更高除杂率。如二次纯化时，50μl-500μl上样均能达到50%以上的收率（超滤一般为30%）和超过90%的除杂率；
Q：操作过程中有何注意事项？
A：首先尽量保持管内填料处于湿润状态，离心后立即加液，如果不立即再生先加入缓冲液将下盖和螺旋盖子盖上拧紧暂时储存。其次，收到离心柱开始操作之前或操作过程中，若不小心将填料弄到管盖，可以加PBS清洗离心至管内。
Q：袖珍柱的清洗液1M NaOH 30%异丙醇，如何配置？
A：1M NaOH 30%异丙醇指的是NaOH的终浓度是1M，异丙醇的终浓度为30%（按照体积比）。以配置1L的1M NaOH 30%异丙醇为例，可取NaOH固体40.01g + 300ml异丙醇，用纯水定容到1L，配完后0.22um滤膜过滤。如果没有NaOH固体，以5M NaOH为例，配置100ml即为5M NaOH 20ml + 30ml异丙醇 + 50ml纯水，混匀后0.22um滤膜过滤。
Q：样本孵育过程中必须摇动吗？需要什么特殊仪器来摇起来？
A：建议最好是旋转孵育，使得样本与填料接触得更充分，能有更好的分离效果。不需要特殊的仪器，实验室所用的摇床就可以，80rpm摇动30min。
Q：旋转孵育过程中进入到管盖里有影响吗？
A：没有影响，孵育30min后一经离心就会都会进入Exosupur®袖珍柱中了。
Q：分离后的外泌体如何保存？
A：外泌体保存问题跟分离方法无关，是由其本身特性决定的，如果条件允许最好使用新鲜的外泌体进行实验，冻存的外泌体容易产生团聚并出现沉淀。实际研究中，外泌体功能实验往往需要大量的外泌体不得不分批提取保存时可-80℃保存；但做biomarker研究时，如RNA组学等，提取外泌体后需尽快完成RNA提取等后续实验。
Q：什么样的外泌体用袖珍柱可以提升电镜质量？
A：电镜下明显有一层杂质覆盖在表层，但能隐约看到囊泡，如下图所示，可以考虑使用袖珍柱二次纯化再次拍摄，以提升电镜质量。如只是杂质，不可见囊泡有一定概率是只有杂质，则不建议尝试。
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文献和实验Kuo Shen, Rui Zheng, Bangrui Yu, etc.,Suppression the glucose-induced ferroptosis in endothelial cells by 4OI-loading exosomes hydrogel for the treatment of diabetic foot ulcer,Chemical Engineering Journal,Volume 497,2024,154696,ISSN 1385-8947, IF=13.3
衣康酸4-辛酯4OI负载外泌体水凝胶抑制葡萄糖诱导的内皮细胞铁死亡治疗糖尿病足溃疡，使用Exosupur袖珍柱去除游离小分子药物4OI
恩泽康泰进军家畜外泌体研究领域——全面解锁猪/牛/羊/鸡外泌体研究
为了聚焦业务需求、提供更好的外泌体科研服务质量，恩泽康泰一向不贪婪，一心搞“人/小鼠/大鼠”临床科研外泌体服务产品，所谓干一行爱一行干好一行，直到今天我们在外泌体组学领域已经与临床客户深度合作发表了150+ SCI文章（其中部分高水平SCI文献已解读，请查阅《合作成果》合辑）。 从2017年6月1号成立到2024年3月底近7年耕耘，从最初开发的专利Exosupur®外泌体纯化试剂盒到集细胞上清/血浆/二次纯化袖珍柱Exosupur®家族，从单纯的纯化试剂盒到集核酸负载
染色步骤中去除游离染料的第 4、5 步必不可少，以避免游离染料对后期实验的干扰。这一步相当于重新提取外泌体，所有外泌体提取纯化方式都适用。 c、去除游离染料的方法推荐选择 3~10KD 的超滤管，利用其置换溶剂功能去除游离染料。具体步骤和实验参数请咨询超滤管厂商。 d、染料标记外泌体与细胞共孵育的培养条件尽可能使用无血清培养基，以提高细胞对染料标记外泌体的摄取效率，共孵育参考时长为 2 小时。 e、本染料也可用于细胞膜染色，参考剂量染料浓度为 2X10–6 M，细胞浓度为 1X107 cells
将外泌体提取纯化，再将治疗药物包载于外泌体中，其优点是制备简易。目前，常用的外源性载药方法包括电穿孔法、共孵育法、超声法、化学转染法及反复冻融法。然而，外源性药物装载也存在一定缺陷，如在装载过程中可能会破坏外泌体的完整性，并且需要额外的纯化步骤来去除未被外泌体捕获的药物。另一种为内源性载药途径，即通过基因工程技术处理或共孵育，将目标分子（如核酸、蛋白和化学药物）先引入供体细胞，再包装进外泌体中，随后外泌体从供体细胞分泌，最后通过分离提纯回收已载药的外泌体。内源性载药的优点是保留了外泌体的完整性和功能
