高效液相色谱法测定三磷酸胞苷二钠中的含量

　　【摘要】  目的:建立三磷酸胞苷二钠注射液含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法（HPLC）。结果:此法可使三磷酸胞苷二钠与二磷酸胞苷二钠、一磷酸胞苷二钠得到非常好的分离。结论:本法适用于本制剂的质量控制。

　　【关键词】  三磷酸胞苷二钠;高效液相色谱法;反相柱

　　三磷酸胞苷二钠（CTP）是一种核苷类药物，在体内参与核酸及磷脂的合成代谢，促进蛋白质的合成，临床上主要用于治疗多种原因引起的神经系统疾病及血管硬化症。CTP非常不稳定，属于热敏感药物，其降产物为二磷酸胞苷二钠（CDP）与一磷酸胞苷二钠（CMP）。以往的测定方法误差较大，且操作繁琐。

　　本文采用高效液相色谱法专用的色谱柱测定CTP含量，并与电泳法［1］ 做对照，具有快速、灵敏等特点，并能对其降解的产物进行定性定量分析，现介绍如下。

　　1 仪器及试药

　　CLASS-VPLC-10A液相色谱仪，日本岛津公司;C18 -4:水性柱:Dogsil5μm4.6×25mm，大连伯瑞集团色谱中心，CMP、CDP、CTP对照品，杭州美亚生物技术有限公司提供。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件 Dogsil C 18 -45μm4.6×250mm色谱柱;检测波长280nm;柱温35℃;流动相为0.2mol.L;磷酸盐缓冲液-甲醇（90∶10）;流速1ml.min。

　　2.2 对照品与供试品溶液的制备 精密称取CTP适量，加流动相配成0.4mg.ml的溶液;CMP、CDP、CTP混合对照溶液:精密称取CMP、CDP、CTP对照品适量，加流动相配成各100μg.ml的溶液;精密量取适量本品，加流动相稀释成0.4mg.ml的溶液。

　　2.3 测定结果 CMP、CDP、CTP混合液、CTP及供试品溶液的测定结果见图1。

　　A CTP对照品     B 混合液      C 空白样品溶液     D 供试品

　　图1 高效液相色谱图（略）

　　2.4 进样精密度 取CTP对照品（0.3653mg.ml），分别进样20μl，连续平行进样5次测定，结果峰面积为5713412、5722092、5732442、5736658、5724372。

　　2.5 线性范围 精密量取上述对照品溶液5、10、20、30、40μl，分别注入液相色谱仪测定，记录峰面积为1449680、2879397、5714532、8511892、11294711，以进样量（μg）为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=63824+769911m，线性相关系数r=1.0000，线性范围1.8μg～14.6μg。

　　2.6 重现性试验 取样品（规格2ml∶20mg）1.6、2.0、2.4ml，各平分3份，置50ml置瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。依法测定结果见表1。

　　表1 重现性试验结果（略）

　　2.7 稳定性试验 精密量取本品1ml，置25ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别于0、2、4、6、8h注入液相色谱仪进行测定。结果峰面积为6274094、629347、6290045、6289152、6281946，均值:6285822，Sx:7803，RSD:0.124%，表明在8h内供试品溶液稳定性较好。

　　2.8 回收率试验 取CTP对照品0.2513g（折纯0.2143g），置25ml置瓶中，加模拟处方液溶解，并稀释至刻度，摇匀，浓度为8.5712mg.ml。分别精密吸取上述配好的溶液各0.8、1.0、1.2ml，各平分3份，置25ml量瓶中，加流动相，摇匀，依法测定含量，计算回收率。结果平均回收率98.80%，RSD为0.2378%。

　　2.9 样品测定 采用液相色谱法和电泳法对实验的6个批号2个规格的中试产品进行了含量测定，结果见表2。

　　表2 6批样品2个规格含量测定结果（略）

　　表2表明，两法测定结果没有区别，均符合规定。

　　3 小结

　　用HPLC法测定本品含量，操作简便、快速、准确，适用于本制剂的质量控制。

　　【参考文献】

　　［1］国家药品标准WS1 -XG-013-200116-272.