细胞内ROS检测试剂盒，足以进行200次荧光检测(红色)，阿

活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生⻓增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）是一种利用荧光探针进行活性氧检测的试剂盒。本试剂盒利用红色荧光探针检测各种动物和植物样本的活性氧。红色荧光的活性氧探针的最大激发/发射波⻓510/610nm。检测荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。根据活细胞中荧光的产生，可以判断细胞活性氧的含量和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典的组织或活细胞中活性氧检测方法。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物，浓度为50mg/mL。Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。本试剂盒只可以用于细胞和新鲜组织样本的活性氧检测，不可以用于冻存的组织样本的活性氧检测。本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。本试剂盒可以测定200个样品200T(96 孔板)。 

产品组成： 

注意事项

1.探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2.阳性对照Rosup 一般使用浓度为100 μM （推荐浓度100-400μM，具体依细胞类型而定）。通常刺激后0.5-4h 可观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30min 内观察不到活性氧的升高，可延⻓诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。

3.对于某些特别的细胞，实验过程中如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:5000 稀释探针的终浓度为2-5 μM。探针装载的时间也可以根据情况在15-60 min 内适当进行调整。

4.活性氧阳性对照(Rosup) 仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。

5.探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波⻓的扫描和发射波⻓的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。

6.尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

8.定量的话要作标准曲线吧。先做一个不同浓度H2O2氧化荧光值，做一条标准曲线，X轴为H2O2浓度，y轴是荧光值，得出一个方程，在看你样品的荧光值即Y值是多少，对应的X值就是。

9.有的细胞装载探针后细胞容易漂起来，洗细胞时实验组会吸走一部分细胞。所以种细胞时细胞量增加一倍，这样细胞紧密连接，贴壁比较牢，实验组的荧光值就高了。另外的探针很敏感，工作液浓度要低一些，1-2μM就够啦，浓度太高容易有非特异性染色。这个探针很不稳定，一旦氧化了本底荧光值就会升高，最好工作液现用现配。

10.染色液为DMSO溶液，气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要充分融解后使用，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

自备器材

激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或荧光酶标仪激发波⻓488～535nm，发射波⻓610nm。离心机，移液器，PBS缓冲液/HBSS（不含酚红），蛋白定量试剂盒

使用说明

1）样本处理：  

刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。准确称取50mg组织，加入1mL匀浆缓冲液A，用玻璃匀浆器充分匀浆。在100×g，4°C离心3分钟，弃沉淀，取上清。 

2）样本检测： 

在96孔板中加入200μL匀浆上清液、2μL DHE探针，用移液器吹打，使之充分混匀。在37°C避光孵育30分钟。置于荧光酶标仪中，后于激发波⻓为488～535nm、发射波⻓610nm检测荧光强度。 

3）蛋白定量： 

另取50μL上清匀浆液，用PBS大约稀释30倍。取100μL进行蛋白定量。 

4）结果处理： 

以荧光强度/毫克蛋白表示组织活性氧强度。