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吉满生物
- 服务名称:
提供自噬 系列慢病毒现货产品和定制服务。
- 规格:
100μl*5管(>1*10^8TU/ml)/100ul*10管(1E8TU/mL)
| 规格: | 100μl*5管(>1*10^8TU/ml) | 产品价格: | 询价 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100ul*10管(1E8TU/mL) | 产品价格: | 询价 |
什么是细胞自噬?
简单的说就是“吃掉自己”。是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。
该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解并得以循环利用。自噬包括生理条件下的基础型自噬和应激条件下的诱导型自噬。研究表明,自噬能在细胞稳态、衰老、免疫、肿瘤发生及神经退行性疾病等多种生理病理过程中发挥重要作用。
(自噬原理图)
LC3(自噬标志物)
是微管相关蛋白轻链3(MAP1LC3)的简称,它贯穿整个自噬过程,哺乳动物的LC3可分为三种:LC3A、LC3B和LC3C。自噬发生时,LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切,产生细胞浆定位的 LC3-I。在自噬过程中,LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3 在内的泛素样体系所修饰和加工,产生分子量为 14kD 的 LC3-II,并定位到自噬小体中。LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比,LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。
得益于荧光蛋白技术的发展,我们可以通过荧光蛋白标记的方式,直观的看到自噬现象和过程。自噬病毒工具,便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。
自噬单荧光标记慢病毒
吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品,当细胞内没有自噬发生时,荧光-LC3融合蛋白会均匀地分散在细胞质中,一旦细胞发生自噬活动,荧光-LC3融合蛋白就会聚集并转位到自噬体膜,此时在荧光显微镜下可清晰地观察到明亮的荧光斑点,斑点数量的多少就代表了自噬活动的强弱。
自噬双荧光标记慢病毒
吉满自主研发的双荧光自噬慢病毒,可用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白,而mRFP是稳定的荧光表达基团,不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。由于自噬溶酶体内的酸性环境,导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱表明溶酶体与自噬小体融合形成了自噬溶酶体。而mRFP是一直稳定表达的,因而可以通过GFP与mRFP的亮点比例来评价自噬流进程。
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文献和实验案例一:Irisin ameliorates doxorubicin-induced cardiac perivascular fibrosis through inhibiting endothelial-to-mesenchymal transition by regulating ROS accumulation and autophagy disorder in endothelial cells
吉满助力
使用pGMLV-GFP-LC3 慢病毒(Genomeditech Co., Ltd.)感染CMEC细胞,使用荧光显微镜观察经过DOX和Irisin处理的CMEC细胞发现(图O-R),Irisin可以促进CMEC细胞自噬的形成,并且可以部分挽救CMEC细胞中因DOX造成的自噬紊乱。

来源于Redox Biol (IF:11.4;Q1).2021 Oct;46:102120.DOI:10.1016/j.redox.2021.102120.
案例二:N6-methyladenosine modification regulates ferroptosis through autophagy signaling pathway in hepatic stellate cells
吉满助力
使用CMV-TurboRFP-EGFP-LC3-PGK-Puro和 pGM-CMV-GFP-hLC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染HSC-LX2细胞,erastin (10μM)处理24小时后,通过观察RFP-GFP-LC3斑点形成发现(如图所示),过表达FTO和敲低METTL4可以显著抑制HSC-LX2细胞铁死亡过程中的自噬流。

来源于Redox Biol(IF:11.4;Q1).2021 Nov;47:102151. DOI:10.1016/j.redox.2021.102151.
案例三:Obatoclax and LY3009120 Efficiently Overcome Vemurafenib Resistance in Differentiated Thyroid Cancer
吉满助力
本研究使用GFP-RFP-LC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染K1细胞,通过共聚焦显微镜观察发现(图A),1 μM Obatoclax处理K1细胞24h后,GFP-RFP-LC3阳性自噬斑点显著增加;TEM观察表明(图B),Obatoclax处理后,K1细胞出现与溶酶体共定位的自噬囊泡形成,并且损伤的溶酶体或大泡明显增加,间接表明Obatoclax中和了溶酶体。


来源于Theranostics(IF:8.579;Q1).2017 Feb 23;7(4):987-1001. DOI: 10.7150/thno.17322.
膜干细胞(PDLSCs) 主要应用:构建自噬双标腺病毒—mRFP-GFP-LC3腺病毒,检测炎症条件下的牙周膜干细胞(I-PDLSCs)成骨化障碍过程中自噬流的变化情况。研究表明,I-PDLSCs自噬-溶酶体系统被抑制,而金纳米颗粒(Au NP)能再激活自噬流,进而抵抗炎症对PDLSCs的成骨化抑制。 Figure 3 I-PDLSCs在成骨诱导早期自噬流降低 Figure 7 Au NP处理促进了I-PDLSCs的自噬和自噬流 案例三 客户单位:复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 文章标题
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