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        【求助】PCR后结果的6倍,能代表mRNA的6倍么?

        丁香园论坛

        3401
        假设PCR后6倍,能代表初始量mRNA就是6倍么?
        有人说能,有人说不能,谁能来解释一下呢?我一直都想不清楚,但是国外文献确实有直接说就是几倍几倍的
        如果RT PCR不能,那么REAL TIME的能么
        在引物设计非常好的情况下,指数扩增时能代表,如果循环数过多,后期就不是指数扩增了,自然就不能代表了。灰度扫描能不能代表真实的倍数,我就不清楚了。real time分析的是指数扩增期,应该能代表。个人看法。
        谢谢楼上,我个人觉得RT PCR灰度或者光密度倍数不能代表初始MRNA的倍数,还想听听其他人的意见,请大家不吝赐教
        个人观点:“PCR后结果的6倍,能代表mRNA的6倍”这样的话肯定是不科学的。内参与目的基因的PCR过程不可能一致的,都受各自的模板、引物、其他条件的制约。只能说明是相对比值。
        Fasta921 wrote:
        个人观点:“PCR后结果的6倍,能代表mRNA的6倍”这样的话肯定是不科学的。内参与目的基因的PCR过程不可能一致的,都受各自的模板、引物、其他条件的制约。只能说明是相对比值。

        RT PCR,如果初始状态,目的/内参灰度=1,经刺激后,目的/内参=2,这样就能说mRNA变为原来的两倍了么?
        RT-PCR检测是很粗糙的,只能说是相对比值!

        PS:即使其他条件一致,模板起始浓度不同,对PCR反应的影响也不同。呵呵
        PCR的速度是和许多因素有关系的。
        1、有平台效应,所以测量的时间得选好
        2、模板链的长度,复杂程度等等(可能影响空间位阻)
        总而言之,要control ,控制变量
        我也覺得不行

        如果有適當的control用Real time可以參考
        不過也只是相對值 不是絕對值...

        光用顏色深淺來比也不夠客觀
        不可以的,real-time PCR的Ct值的差异是可以代表的
        凑个热闹,顺便说说2句。“假设PCR后6倍,能代表初始量mRNA就是6倍么?”我可以肯定的说这是不行的。为什么?我想大家学过数学的都应该清楚吧。
        PCR 理论方程:N = N0 x (1+E)n (这是指n次方) N:扩增子数量 N0:起始模板数量 E:扩增效率 n:循环数
        那么这样的话大家应该清楚了吧。N0作为起始模板数量,粗略一比好像还真是这样的吗,但事实上我认为是行不通的,为什么呢?其最重要的就是这个扩增效率不能得到保证。PCR有3个期大家都是很清楚的,对于realtime来说可能能够反应,但是个人认为没有精确性。普通的在第二期线性期就不能保证一致了,应该扩增效率与很多因素相关的。
        个人观点,大家继续讨论哈。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

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