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        qpcr时引物浓度多加了5倍,结果还能用吗?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

        user-title

        Neough

        本人qpcr小白,一开始科室的同门跟我说染料法qpcr合成的引物根据管壁需要加的ddH2O的量溶解成100微摩尔,后来我做探针法qpcr也是根据这样的量加体系,导致每个孔的引物和探针都多加了五倍,请问这样跑出来的结果还能用吗?影响会很大吗?

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        5 个回答

        user-title

        dxy_mqg1dtg8

        有帮助

        这种情况下,可能会对您的实验结果产生一些影响。

        1.引物和探针的浓度增加:引物和探针的浓度过高可能会导致非特异性扩增或引物和探针之间的相互作用,从而影响结果的准确性。 

        2.PCR效率的变化:引物和探针浓度的增加可能会改变反应体系的PCR效率。这可能会导致扩增曲线的形状发生变化,包括延迟扩增的时间和扩增曲线的平台高度等。 

        3.信号强度的增加:引物和探针浓度的增加可能会导致信号强度的增加。这可能会导致信号饱和,使得结果难以解读。

        综上所述,使用错误浓度的引物和探针进行qPCR可能会对实验结果产生一定的影响。为了获得准确和可靠的结果,建议您根据探针法qPCR的相关指导文献或实验室标准操作程序,正确制备反应体系,并严格按照推荐的引物和探针浓度使用。

         

        user-title

        feixue7758527w

        有帮助

        估计不能用了,差异太大了,肯定会影像最后结果的。还是重新做吧。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        不建议使用了,引物浓度过大做qpcr不易成功,而且会影响结果准确性

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        这种情况跑出来的结果会有很大影响,结果不能用了,建议重新做。

        user-title

        sswei

        有帮助

        可能会生成引物二聚体,降低效率.

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