丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

qpcr时引物浓度多加了5倍,结果还能用吗?

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

user-title

Neough

本人qpcr小白,一开始科室的同门跟我说染料法qpcr合成的引物根据管壁需要加的ddH2O的量溶解成100微摩尔,后来我做探针法qpcr也是根据这样的量加体系,导致每个孔的引物和探针都多加了五倍,请问这样跑出来的结果还能用吗?影响会很大吗?

wx-share
分享

5 个回答

user-title

dxy_mqg1dtg8

有帮助

这种情况下,可能会对您的实验结果产生一些影响。

1.引物和探针的浓度增加:引物和探针的浓度过高可能会导致非特异性扩增或引物和探针之间的相互作用,从而影响结果的准确性。 

2.PCR效率的变化:引物和探针浓度的增加可能会改变反应体系的PCR效率。这可能会导致扩增曲线的形状发生变化,包括延迟扩增的时间和扩增曲线的平台高度等。 

3.信号强度的增加:引物和探针浓度的增加可能会导致信号强度的增加。这可能会导致信号饱和,使得结果难以解读。

综上所述,使用错误浓度的引物和探针进行qPCR可能会对实验结果产生一定的影响。为了获得准确和可靠的结果,建议您根据探针法qPCR的相关指导文献或实验室标准操作程序,正确制备反应体系,并严格按照推荐的引物和探针浓度使用。

 

user-title

feixue7758527w

有帮助

估计不能用了,差异太大了,肯定会影像最后结果的。还是重新做吧。

user-title

土井挞克树

有帮助

不建议使用了,引物浓度过大做qpcr不易成功,而且会影响结果准确性

user-title

huarenqiang5

有帮助

这种情况跑出来的结果会有很大影响,结果不能用了,建议重新做。

user-title

sswei

有帮助

可能会生成引物二聚体,降低效率.

ad image
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序