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        【求助】wnt途径实验设计

        丁香园论坛

        1590
        各位前辈,同道!小妹想做关于wnt通路抑制家族基因,如sFRP家族,DKK家族甲基化在肿瘤发生发展中的作用。关于这方面看了些文章,还是有很多地方比较不解,请大家帮忙指点一二!
        1.非磷酸化形式的bata-catenin是wnt signaling pathway的关键分子,我想问的是如果免疫荧光没有检测出batacatenin的定位异常,或者western没有检测出其活性形式表达量增多,是不是就能说明wnt途径在这个肿瘤中不起作用,那么是不是我就没有继续做相应抑癌基因的意义啦??2.要检测抑癌基因对这个通路的影响,是不是应该构建该抑癌基因的表达载体后和TOPflash质粒及PRL-TK共同转染于一个细胞中,观察比较与空载体及TOPflash,PRL-TK共转染细胞的相对荧光值??
        3.表达载体转染细胞后,是否还应该western检测c-myc等表达情况比较好??
        4.检测这个双报告基因表达,需用的仪器是叫超灵敏管式发光仪吗?北京都有那些实验室有啊?有商业化做双报告基因表达检测的吗
        无人应答!自己坐沙发!快来帮助我一下吧!
        检测双荧光报告基因的表达,可以采用的设备有很多,只要是能够检测荧光强度的仪器,就可以,我们采用的是PE公司的Enspire设备,此套设备可以用来检测一切荧光,包括化学发光以及生物发光,操作平台为96孔板。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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