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        【求助】新手求助,关于基因沉默的,谢谢拉

        丁香园论坛

        2479
        我做水稻基因后期功能验证的时候,需要构建基因沉默载体,然后转基因至正常植株中,看有没有目标表型

        现在我照着用得比较多的,自己重组改造了pNW55得到artificial miRNA,然后装到过表达的载体中,然后转基因。

        不过因为实验室还没有这方面的成功先例,怕不保险,所以也想做一下siRNA,网上有很多在线设计,通过Blast验证以后,基本确定了几个RNAi的目标。

        想问一下这方面的专家
        1. artificial miRNA和siRNA有什么异同啊?自己概念很模糊。哪个的沉默抑制效果比较有保障些呢?

        2. siRNA是不是只能让公司合成?可以自己用PCR组装么?怎么操作?网上找了半天没找到

        3. 如果让公司合成的话,哪个公司好些?

        谢谢大家了
        我想做动物的,也在关注中。
        1. artificial miRNA和siRNA有什么异同啊?自己概念很模糊。哪个的沉默抑制效果比较有保障些呢?

        植物中4 条RNA 沉默途径分别由微小RNA(miRNAs)和3 种小干扰RNA (siRNAs)介导,包括反式作用siRNAs (ta-siRNAs)、天然反义siRNAs (natsiRNAs)和异染色质siRNAs (hc-siRNAs)。
        siRNA 途径是由dsRNA 引发的,而miRNA 途径由内源性hpRNA诱导.
        个人意见,siRNA 转录后基因沉默的作用更强一些,而且有很多参考文献。

        2. siRNA是不是只能让公司合成?可以自己用PCR组装么?怎么操作?网上找了半天没找到

        公司合成当然可以,用PCR构建iphRNA载体也行,GATEWAY或融合pcr都行,方法有很多,CNKI上搜iphRNA。

        3. 如果让公司合成的话,哪个公司好些?
        这个不好说,自已决定吧。

        动物方面选择余地就更大了。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】新手求助,关于基因沉默的,谢谢拉

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