简介
Feulgen反应由Feulgen在1924年发明，是一种传统的、也是最为经典的通过化学染色来特异性显示细胞中DNA的方法。
原理
Feulgen反应显示细胞中DNA的基本原理是首先采用稀酸作用于DNA，使其脱去嘌呤碱，暴露出游离醛基，该醛基与Schiff试剂反应生成紫红色产物，细胞中存在有DNA的部位即呈现紫红色阳性反应。如图3-1中所示，碱性品红是红色物质，能与产生SO2的试剂作用形成无色产物，即Schiff试剂，它可以与DNA水解释放出的醛基结合而氧化为紫红色化合物。
用途
Feulgen 反应显示细胞中 DNA 既可检测细胞或组织中 DNA 的存在部位及分布，也可利用其显色强度与 DNA 含量成正比的特性，用于对细胞或组织中的 DNA 含量进行测定。由于反应对含有 DNA 的核结构显示细致、清晰，染色稳定，有利于鉴别不同核结构和分化程度的细胞，如白血病细胞等。
材料与仪器
步骤
Feulgen 反应显示细胞中 DNA 的基本过程可分为如下几步：
A.将培养的 HeLa 细胞接种于盖片，24～48 h 后生长为单层。
B.取细胞盖片1 张 ，用 Hanks 液（pH 7.2～7.4）漂洗3 次 ，吸水滤纸吸干液体。
C.放入 Carnoy 固定液中固定30 min 。
D.蒸馏水洗3 次 。
E.将盖片置于1 mol ／L 盐酸中，60 ℃ 水浴水解10 min 。
F.蒸馏水洗1 次 。
G.将盖片移入 Schiff 试剂中，暗处反应30 min 。
H.流水冲洗5 min 。
I.蒸馏水洗3 次 。
J.0.5％亮绿复染1～3 min 。
K.70％乙醇→80％乙醇→95％乙醇→无水乙醇梯度脱水。
L.盖片浸入二甲苯中透明5 min 。
M.滴1 滴 中性树胶于载玻片上，将盖片细胞面朝下封片。
N.镜下观察。
注意事项
1.本实验的关键步骤是有效地控制DNA水解的程度，包括稀酸的浓度，水解的时间、温度等。水解不足，会使游离醛基的暴露不完全，反应变弱；水解过度，会导致 DNA 异常降解，也同样使反应变弱，染色深度下降，严重时出现阴性反应。一般的水解时间应控制在10～15 min ，同时应考虑不同标本材料的影响。
2. Schiff 试剂的质量也是影响实验结果的重要因素，试剂暴露于空气中易被氧化而变成红色，使试剂失效。操作及保存中不宜过多暴露于空气，并应注意避光。
3.本实验采用盖片培养细胞，因此在整个操作过程中，应注明盖片的正反面，防止破坏细胞面，尤其在进行流水冲洗步骤时，应避免水流直接接触细胞面。
来源：丁香实验
